1、本論文通過系統(tǒng)篩選，從植物枸骨（Llex cornuta Lindl.）中分離到的一株具有高抗菌活性的內(nèi)生真菌，并以此作為研究對(duì)象，對(duì)該內(nèi)生真菌進(jìn)行了種屬鑒定，并對(duì)其代謝產(chǎn)物中主要活性成分進(jìn)行了提取、分離和結(jié)構(gòu)解析；在此基礎(chǔ)上研究了主要活性成分的分析檢測(cè)方法和抑菌作用，通過紫外誘變選育出高效活性生產(chǎn)菌株，運(yùn)用隨機(jī)擴(kuò)展多態(tài)性DNA（RAPD）技術(shù)對(duì)該菌及其誘變體進(jìn)行DNA多態(tài)性分析，最后對(duì)活性成分的安全性和藥效進(jìn)行了評(píng)價(jià)。主要研究結(jié)果如下

2、：
　?。?）枸骨內(nèi)生真菌的屬種鑒定：根據(jù)形態(tài)培養(yǎng)特征和生理生化特征，對(duì)照《真菌鑒定手冊(cè)》將該內(nèi)生真菌初步歸屬為木霉屬真菌哈茨木霉（Trichoderma harzianum Rifai），將其命名為哈茨木霉菌株L。
　?。?）哈茨木霉菌株L的代謝產(chǎn)物的主要抗菌活性成分：分離純化得到哈茨木霉菌株L代謝產(chǎn)物的主要抗菌活性成分，經(jīng)IR、MS和NMR光譜分析確定為一倍半萜類化合物，英文名稱為：trichodermin，化學(xué)名稱：4

3、β-乙?；?12，13-環(huán)氧-9-單端孢霉烯。并且建立了該物質(zhì)的氣相色譜分析方法。
　?。?）活性物質(zhì)trichodermin的抑菌活性：室內(nèi)毒力測(cè)定結(jié)果表明，Trichodermin對(duì)9種植物病原真菌的菌絲生長(zhǎng)和2種植物病原真菌孢子的萌發(fā)均有不同程度的抑制作用。其中對(duì)水稻紋枯病菌[Thanatephorus cucumeris（Frank）Donk]和黃瓜立枯病菌（Rhizoctonia solani Küehn）有較好的毒力，

4、其 EC50值分別為0.7071μg/mL和0.3253μg/mL；對(duì)番茄灰霉病菌（Botrytis cinerea Pers）和番茄早疫病[Alternaria solani（Ellis et Martin） Jones et Grout.]，毒力作用次之，其EC50值分別為3.7287μg/mL和10.6772μg/mL；對(duì)黃瓜枯萎病菌（Fusarium oxysporum f.sp.cucumerinum Owen）、西瓜枯萎病菌

5、（Fusarium oxysporium f.sp.niveum）、菜豆炭疽病菌[Colletotrichum lindemuthianum（sacc. et Magn.）Br. et Cav.]和葡萄炭疽病菌[Colletotrichum gloeosporioides（Penz.）Sacc.]的毒力相對(duì)較弱，其EC50值分別為23.4072、41.6013、33.0261和28.6393μg/mL；對(duì)水稻胡麻斑病菌[Cochliob

6、olus miyabeanus（Ito&Kuribayashi）]的毒力最差（>800μg/mL）。對(duì)黃瓜枯萎病菌（F. oxysporum f.sp.cucumerinum）和西瓜枯萎病菌（F.oxysporium f.sp.niveum）孢子萌發(fā)的抑制作用EC50分別為2.2209和2.2905μg/mL?；铙w試驗(yàn)結(jié)果表明，Trichodermin濃度為100mg/L時(shí)，對(duì)番茄早疫?。ˋ.solani）及黃瓜立枯?。≧..solan

7、i）的保護(hù)效果達(dá)97.8％和98.1%，治療效果達(dá)96.7%和97.3%。
　?。?）Trichodermin制劑的藥效、安全性及毒理學(xué)研究：盆栽試驗(yàn)結(jié)果表明，Trichodermin1000倍液對(duì)黃瓜立枯?。≧..solani）有良好的治療和保護(hù)作用，7天后保護(hù)防效和治療防效分別為88.89%和95.83%； Trichodermin在番茄及土壤中降解較快，殘留極低，施藥后的第10天trichodermin在番茄中的殘留量?jī)H0.

8、0054mg/kg，在土壤中的殘留量?jī)H為0.0013mg/kg；經(jīng)毒理學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，Trichodermin原藥產(chǎn)品對(duì)哺乳類動(dòng)物十分安全，按 GB15670-1995《農(nóng)藥登記毒理學(xué)試驗(yàn)方法》的分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)該農(nóng)藥的原藥屬低毒。
　?。?）高效菌株的選育及誘變前后菌株RAPD分析：以哈茨木霉菌株L作為出發(fā)菌株，進(jìn)行紫外線二次復(fù)合誘變處理，通過初篩和復(fù)篩，獲得一株高產(chǎn)突變株 UV-5-3，其產(chǎn)素水平為164.75μg/mL，是原始菌株2.3

9、倍。傳代試驗(yàn)表明，該突變株的高產(chǎn)性能遺傳特性較穩(wěn)定。運(yùn)用RAPD技術(shù)對(duì)哈茨木霉菌株L及相應(yīng)誘變體進(jìn)行DNA多態(tài)性分析，12條隨機(jī)引物共擴(kuò)增出106條譜帶，多態(tài)性標(biāo)記數(shù)為58條，占擴(kuò)增總帶數(shù)的54.7%。DNA片段大小范圍在300~5000bp內(nèi)，大多數(shù)集中在600~2000bp。利用NTSYS統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)擴(kuò)增結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)和聚類，結(jié)果表明，哈茨木霉菌株 L誘變前后具有一定的遺傳穩(wěn)定性和遺傳多態(tài)性，但供試菌株的RAPD分析與其生防效果之間不存