象耳豆根結線蟲MeCPI基因的分離與鑒定.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、象耳豆根結線蟲(Meloidogyne enterolobii)寄主范圍廣,繁殖率高,致病力強,可寄生攜帶Mi抗性基因的番茄(Solanum lycopersicum)和辣椒(Capsicum frutescens)。如今,象耳豆根結已成為全球熱帶、亞熱帶地區(qū)作物的一個重要病原物。該線蟲在我國南方地區(qū)分布較廣,且嚴重危害多種作物,目前已在20多種經(jīng)濟作物及多種熱帶水果上分離到該線蟲。象耳豆根結線蟲在其寄生過程中,向寄主植物細胞中分泌多種

2、由線蟲食道腺細胞表達的效應子蛋白,分離和鑒定這些效應子蛋白的功能有助于理解象耳豆根結線蟲的分子致病機理。本文通過同源克隆的方法,克隆到象耳豆根結線蟲的一個半胱氨酸蛋白酶抑制劑基因MeCPI,并通過原位雜交、齡期表達、體外RNAi和瞬時表達等方法,初步分析了MeCPI的功能。
  1.經(jīng)同源克隆得到了象耳豆根結線蟲的MeCPI基因。該基因的cDNA全長為444bp,DNA全長為1543bp,含有4個內含子。MeCPI基因編碼的蛋白質

3、含有147個氨基酸殘基,用 SignalP預測該蛋白含有信號肽序列。該蛋白含有一個半胱氨酸蛋白酶抑制劑蛋白保守結構域。
  2.通過原位雜交的技術,研究了 MeCPI基因在象耳豆根結線蟲侵染前二齡幼蟲中的定位。結果顯示,該基因在象耳豆根結線蟲的背食道腺部位表達。
  3. qRT-PCR結果表明,MeCPI基因在四齡幼蟲階段表達量最高,在三齡幼蟲階段也有較高的表達量,而在卵和侵染前二齡幼蟲階段表達量非常低。表明 MeCPI基

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