1、目的:信號轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄活化因子3(STAT3)是一個核轉(zhuǎn)錄因子，被證明是多個腫瘤致發(fā)生的相關(guān)信號通路的匯集點，對腫瘤細胞凋亡、增殖、以及腫瘤組織新生血管生成等都具有調(diào)控作用。結(jié)直腸癌是世界范圍內(nèi)最常見的惡性腫瘤之一，在美國40-79歲的人群中，它是第二位導(dǎo)致死亡的惡性腫瘤。RNA干擾(RNAi)技術(shù)是一種能特異的沉默轉(zhuǎn)錄后基因的機制，能有效的抑制目的mRNA的表達，從而抑藥物開發(fā)和疾病治療等研究領(lǐng)域。本論文將利用RNAi技術(shù)特異性抑制人結(jié)

2、腸癌sw620細胞中STAT3基因的表達，然后對細胞水平上的抗腫瘤作用和機理進行研究。
　　方法:將針對STAT3基因的干擾短發(fā)卡RNA(short hairpin RNA，shRNA)克隆到pGenesil-1質(zhì)粒表達載體中，命名為p-shSTAT3。P-shSTAT3質(zhì)粒轉(zhuǎn)染sw620細胞48 h后，利用RT-PCR和Western blot技術(shù)檢測STAT3基因mRNA和蛋白水平上的表達情況。利用Hochest33258染色

3、對轉(zhuǎn)染p-shSTAT3后sw620細胞的凋亡情況進行檢測;利用Western blot技術(shù)對p53、Caspase3、Bax、Bcl-xL和Bcl-2等凋亡相關(guān)蛋白的表達情況進行了檢測。
　　結(jié)果:轉(zhuǎn)染p-shSTAT3質(zhì)粒能在細胞水平上有效抑制sw620細胞中STAT3基因在mRNA和蛋白水平上的表達。Hochest33258染色表明在sw620細胞中干擾掉STAT3基因的表達能顯著誘導(dǎo)細胞凋亡的發(fā)生(P＜0.05)，亂序?qū)φ?/p>

4、p-shSc無明顯的促凋亡作用。對作用機理進行研究后發(fā)現(xiàn)，在sw620細胞中干擾掉STAT3基因的表達促進了p53、Caspase3和Bax三個凋亡誘導(dǎo)蛋白的表達;同時抑制了凋亡抑制蛋白Bcl-xL和口Bcl-2的表達。
　　結(jié)論:利用RNA干擾技術(shù)抑制掉sw620細胞中STAT3基因的表達能有效誘導(dǎo)p53、Caspase3和Bax的表達;抑制Bcl-xL和Bcl-2的表達，進而產(chǎn)生促進sw620細胞凋亡發(fā)生的抗腫瘤作用，為結(jié)腸癌