1、目的：探討1-甲基-4-苯基-吡啶離子（MPP+）誘導人神經(jīng)母細胞瘤（SH-SY5Y）細胞凋亡過程中p53及其相關基因的變化，并探討葛根素的保護作用。
　　方法：用含13％胎牛血清的DMEM完全培養(yǎng)基進行傳代培養(yǎng)人神經(jīng)母細胞瘤（SH-SY5Y）細胞。按實驗設計將細胞分為6組：對照組；MPP+模型組；50μmol/L葛根素+MPP+處理組；100μmol/L葛根素+MPP+處理組；150μmol/L葛根素+MPP+處理組；p53抑制

2、劑（Pifithrin-ɑ）+MPP+處理組。采用倒置顯微鏡觀察各組SH-SY5Y細胞形態(tài)學的改變；噻唑藍（MTT）法測定各組SH-SY5Y細胞存活率；Annexin-V/PI流式細胞分析術檢測各組SH-SY5Y細胞凋亡率；免疫印跡法（Western blotting）檢測各組SH-SY5Y細胞中p53蛋白的相對表達量；實時熒光定量PCR（real-time quantitative reverse transcription-PCR，

3、RT-PCR）技術分析各組SH-SY5Y細胞中p53及其相關基因p21、MDM2、Bax、Bcl-2、Caspase-3 mRNA相對表達量。
　　結果：1.形態(tài)學改變，對照組細胞呈梭形，細胞突起結構較長較多；MPP+模型組細胞大部分突起結構減少，細胞變圓，貼壁細胞數(shù)目減少；葛根素預處理組和p53抑制劑（Pifithrin-ɑ）組，細胞形態(tài)逐漸好轉。2 MTT結果顯示對照組，MPP+模型組，50μmol/L葛根素+MPP+處理組，

4、100μmol/L葛根素+MPP+處理組，150μmol/L葛根素+MPP+處理組，Pifithrin-ɑ+MPP+處理組的細胞存活率分別為100.0%±0.0%、36.0%±0.5%、52.0%±3.0%、76.6%±4.8%、86.0%±2.0%、92.0%±2.0%，葛根素和p53抑制劑預處理可以明顯提高細胞存活率（P<0.05）。3 Annexin-V/PI流式細胞分析術檢測結果顯示對照組，MPP+模型組，50μmol/L葛根素

5、+MPP+處理組，100μmol/L葛根素+MPP+處理組，150μmol/L葛根素+MPP+處理組，Pifithrin-ɑ+MPP+處理組的細胞凋亡率分別為12.01%±3.31%、31.78%±1.50%、25.34%±1.06%、21.70%±3.2%、16.28%±0.90%、14.23%±2.43%，表明葛根素可以降低MPP+誘導的SH-SY5Y細胞的凋亡率（P<0.05）；同樣，p53抑制劑也可以降低MPP+誘導的SH-SY

6、5Y細胞的凋亡率（P<0.05）。4 Western blotting檢測p53蛋白的表達結果表明MPP+使p53蛋白的表達增高，差異具有統(tǒng)計學意義（P<0.05），而葛根素和p53抑制劑干預又使p53蛋白的表達降低。對照組，MPP+模型組，50μmol/L葛根素+MPP+處理組，100μmol/L葛根素+MPP+處理組，150μmol/L葛根素+MPP+處理組，Pifithrin-ɑ+MPP+處理組的p53蛋白相對表達量分別為0.12

7、±0.01、0.84±0.03、0.72±0.02、0.51±0.03、0.32±0.02、0.21±0.02。5 RT-PCR結果表明MPP+誘導可以增加p53 mRNA表達；葛根素預處理下調了p53基因及其相關基因p21、Bax、Caspase-3的mRNA的表達，上調了p53基因的負調節(jié)因子MDM2和凋亡抑制基因Bcl-2的mRNA的表達。給予p53基因抑制劑干預后，p53基因及其相關基因p21、Bax、Caspase-3、MDM

8、2、Bcl-2的mRNA的表達變化與給予葛根素干預后的結果呈現(xiàn)出較為相似的結果。對照組，MPP+模型組，50μmol/L葛根素+MPP+處理組，100μmol/L葛根素+MPP+處理組，150μmol/L葛根素+MPP+處理組，Pifithrin-ɑ+MPP+處理組的細胞中p53基因的相對表達量分別為1.00±0.00、1.79±0.08、1.66±0.03、1.35±0.10、1.19±0.04、1.10±0.02；p21基因的相對表

9、達量分別為1.00±0.00、1.91±0.04、1.80±0.02、1.67±0.07、1.43±0.12、1.24±0.07；MDM2基因的相對表達量分別為1.00±0.00、0.62±0.11、0.88±0.08、1.27±0.18、1.50±0.18、1.69±0.36；Bax基因的相對表達量分別為1.00±0.00、2.53±0.14、1.90±0.39、1.61±0.32、1.16±0.43、1.03±0.12；Bcl-2基

10、因的相對表達量分別為1.00±0.00、0.18±0.06、0.74±0.07、2.19±0.16、2.30±0.30、2.47±0.20；Caspase-3基因的相對表達量分別為1.00±0.00、1.54±0.09、1.29±0.11、1.09±0.06、1.04±0.18、1.01±0.11。
　　結論： MPP+誘導可以導致SH-SY5Y細胞中p53的激活轉錄并誘導一系列相關靶基因的活化從而導致細胞凋亡，說明p53在SH-