1、目的：髓源抑制細胞（myeloid derived suppressor cells，MDSCs）是一群異質(zhì)性的髓系來源未成熟細胞，對T細胞有強烈的抑制作用，參與多種疾?。ò[瘤、自身免疫性疾病等）的發(fā)生和發(fā)展。已有研究顯示，膿毒癥中MDSCs數(shù)量顯著增多，但其在膿毒癥不同階段的可能存在不同的作用。同時，MDSCs的表型在膿毒癥不同階段也會發(fā)生演變，但其分子機制尚不清楚。
　　MicroRNA是一類小型的（20-23個核苷酸長度

2、）非編碼RNAs，具有調(diào)節(jié)基因表達的功能，廣泛分布于真核細胞中，具有高度保守性、時序表達及組織表達特異性。它在轉(zhuǎn)錄水平調(diào)控基因基因表達，從而影響多種病理生理過程。大量研究報道，microRNA在免疫反應的調(diào)節(jié)中起重要作用。
　　本研究采用國際通用的盲腸穿孔結(jié)扎（cecal ligation and puncture，CLP）膿毒癥模型，它可以模擬從膿毒癥早期促炎癥反應到晚期抗炎反應和免疫抑制狀態(tài)的進展過程。研究證實在CLP后MDS

3、Cs大量增殖，并且在膿毒癥后期骨髓中MDSCs的比例可以達到85％以上。大量研究報道也發(fā)現(xiàn)髓源抑制細胞（MDSCs）的免疫抑制特性與膿毒癥進展過程中免疫功能紊亂有關(guān)，但其具體的調(diào)控機制需要進一步的研究證實。本實驗分離膿毒癥3天和7天的MDSCs，比較其表型差異；并檢測MDSCs中miR-146a的表達，了解其與MDSCs表型變化之間的關(guān)系，探討miR-146a對膿毒癥MDSCs表型的影響。
　　方法：（1）收集分離CLP后3天和7

4、天時小鼠骨髓MDSCs細胞。（2）將CLP后3天和7天分離骨髓中的MDSC進行體外培養(yǎng)并給與脂多糖（LPS）刺激，收集細胞培養(yǎng)上清液，分別檢測CLP后3天和7天時MDSC分泌的細胞因子（TNF-α、TGF-β、IL-6、IL-10）。（3）檢測CLP后3天和7天時MDSCs細胞的精氨酸酶活性。（4）T細胞增殖實驗，檢測CLP后3天和7天時MDSC細胞對T細胞的抑制作用。（5）QRT-PCR檢測CLP后3天和7天時小鼠骨髓MDSC中miR

5、-146a表達。
　　結(jié)果：CLP后3天和7天的MDSCs分泌細胞因子的能力有顯著差異（P<0.05），CLP后3天時以分泌促炎因子（TNF-α、IL-6）為主，CLP后7天時以分泌抗炎因子（IL-10、TGF-β）為主。并且CLP后3天和7天的MDSCs分泌的精氨酸酶也表現(xiàn)顯著差異（P<0.05），CLP后7天比3天時表現(xiàn)出更高的精氨酸酶活性。通過T細胞增殖實驗也證實CLP后3天和7天的MDSCs細胞對T細胞的抑制作用有顯著差異

6、(P<0.01），CLP后7天時有更強的抑制活性。又通過QRT-PCR檢測小鼠骨髓MDSCs中miR-146a表達，發(fā)現(xiàn)CLP7天時和CLP3天時表達量有顯著差異（P<0.001），CLP7天時比3天時的miR-146a表達量顯著升高（P<0.001）。
　　結(jié)論：在膿毒癥的進展過程中，MDSCs表型隨之發(fā)生演變，膿毒癥晚期MDSCs免疫抑制活性較早期顯著增強。miR-146a表達上調(diào)可能是膿毒癥晚期MDSCs免疫抑制活性增強的重