1、研究背景及目的:鼻息肉(NasalPolyps，NP)是一種常見的鼻科增生性疾病，其發(fā)病機制復(fù)雜，至今沒有真正闡明。自從內(nèi)窺鏡手術(shù)廣泛開展以來，其術(shù)后復(fù)發(fā)率已明顯降低。但部分鼻息肉，如“鼻息肉病”，其手術(shù)后的復(fù)發(fā)率始終較高。有些患者往往在經(jīng)歷多次手術(shù)以及長期使用局部皮質(zhì)類固醇激素噴鼻劑，甚至部分患者須服用較長時間的低劑量激素口服制劑后，仍然會再次復(fù)發(fā)息肉，大大增加了患者的痛苦及思想與經(jīng)濟負擔(dān)。
　　 對此類鼻息肉患者個體的預(yù)后，

2、目前幾乎完全依賴鼻科醫(yī)師的臨床經(jīng)驗進行主觀判斷，尚無廣泛認可的具有臨床參考價值的客觀指標(biāo)。近年來，在鼻息肉發(fā)病機制中關(guān)于細胞凋亡方面的研究正在逐步增加。目前已做了一些卓有成效的工作。特別是在腺體促增殖/抑增殖或促凋亡/抑凋亡因素的動態(tài)平衡方面、息肉上皮、息肉組織中嗜酸粒細胞等方面均取得一些成果。目前研究結(jié)果初步認為鼻息肉上皮細胞有顯著的增殖特性;凋亡基因/抑凋亡基因失衡，使細胞凋亡受抑制是鼻息肉組織中嗜酸粒細胞數(shù)增多的重要因素之一。

3、r>　　 Livin是IAPs(inhibitorsofapoptosisproteins，IAPs)蛋白家族的新成員，有BIR和RING鋅指結(jié)構(gòu)域，能夠與Caspases蛋白結(jié)合，抑制其介導(dǎo)的細胞凋亡。它在大多數(shù)正常成人組織中不表達、在一些腫瘤及增殖性病變細胞中有高表達。Caspases蛋白在介導(dǎo)細胞凋亡中處于重要地位，大多數(shù)的刺激性信號是經(jīng)由Caspase級聯(lián)反應(yīng)，激活并誘導(dǎo)細胞凋亡的。Livin與其中多個成員相互作用，抑制細胞凋

4、亡的執(zhí)行，例如，Livin可結(jié)合caspase-9的前體蛋白及其激活的形式，從而抑制其功能。
　　 Smac/DIABLO是一個促進凋亡的重要相關(guān)蛋白，具有239-氨基酸殘基，一般定位于線粒體的膜間隙。當(dāng)?shù)蛲鲂盘柎碳mac/DIABLO時，Smac會伴隨著細胞色素c的釋放進入胞漿，成熟的Smac在離開線粒體后，可與XIAP、Livin等IAPs家族成員鋅指結(jié)構(gòu)域BIR3上的表面溝結(jié)合，而這個溝是用于結(jié)合caspase9的部位，

5、因而Smac能競爭性去除IAPs對凋亡的抑制，從而進一步激活Caspase級聯(lián)反應(yīng)，最終誘導(dǎo)細胞凋亡。
　　 Mcm3，即微小染色體維持蛋白3，作為Mcms家族中重要的一員，與生物體DNA復(fù)制過程密切相關(guān)。MCMs家族目前有7種。微小染色體是指酵母中一系列核小體被包裝后形成的結(jié)構(gòu)，是酵母復(fù)制的結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)。
　　 同經(jīng)典的增殖性標(biāo)記物Ki-67相比，兩者雖都定位于增殖細胞中。只有Mcm3能夠在相當(dāng)數(shù)量的處于生長靜止期的細胞中

6、表達陽性，而Ki-67無表達，可以認為Mcm3作為一種細胞增殖標(biāo)記物，較Ki-67更有意義。
　　 目前關(guān)于Livin，Smac和Mcm3在NP中表達的相關(guān)研究很少。三者聯(lián)合檢測分析，并與NP臨床分型分期和術(shù)后復(fù)發(fā)率之間做相關(guān)性研究，指導(dǎo)耳鼻喉科醫(yī)師制定更加適宜的個體化手術(shù)治療及隨訪方案，在國內(nèi)外目前的檢索文件中尚未見報道。
　　 本文主要研究目的在于:(1)通過聯(lián)合檢測3種典型的細胞凋亡/增殖相關(guān)因子:Livin，Sm

7、ac和Mcm3在NP的表達特點，進一步探索NP在細胞凋亡途徑可能的發(fā)病機制，為進一步闡明細胞凋亡機制在NP的發(fā)生、發(fā)展中的重要作用，具有較強的理論意義。(2)并通過對上述3種細胞凋亡/增殖因子的表達水平與NP臨床分型分期及術(shù)后復(fù)發(fā)率進行相關(guān)性分析，探索一條能較為客觀科學(xué)地預(yù)測NP患者術(shù)后復(fù)發(fā)可能性的分子水平途徑，可作為臨床參考指標(biāo)，與鼻科醫(yī)師的臨床經(jīng)驗性判斷互為補充，用于指導(dǎo)耳鼻喉科醫(yī)生對NP患者在手術(shù)治療、圍手術(shù)期處理以及隨訪等方面進

8、行個體化的制定，以改善目前主要憑醫(yī)師臨床經(jīng)驗做出判斷的現(xiàn)狀，有效減少復(fù)發(fā)，具備實際的臨床應(yīng)用價值。
　　 方法:于山東大學(xué)第二醫(yī)院病理科檢驗并保存的2005年6月～2009年6月期間入院的單純鼻息肉患者蠟塊中隨機選取80例，男性52例，女性28例，平均年齡34.5歲（19～57歲），臨床分型分期為Ⅱ型Ⅰ期24例，Ⅱ型Ⅱ期26例，Ⅱ型Ⅲ期16例，Ⅲ型14例。均病理確診為鼻息肉.通過詳細詢問病史、臨床癥狀、鼻內(nèi)窺鏡檢查、變應(yīng)原皮膚試

9、驗（參照2008年WHO制定的《過敏性鼻炎的處理及其對哮喘的影響》以及中華醫(yī)學(xué)會呼吸病學(xué)分會哮喘學(xué)組制定的2008年《支氣管哮喘防治指南》），均排除變應(yīng)性鼻炎、哮喘等變態(tài)反應(yīng)性疾病史。80例患者隨訪復(fù)查期均超過12個月。隨訪期內(nèi)經(jīng)病理證實復(fù)發(fā)者（所有復(fù)發(fā)患者均首先在鼻內(nèi)窺鏡復(fù)查時發(fā)現(xiàn)息肉樣新生物，向患者講明目前病情并由本人簽署我院特殊檢查治療知情同意書后，然后行內(nèi)窺鏡下鼻息肉清理并送病理科再次診斷），Ⅱ型Ⅰ期2例，Ⅱ型Ⅱ期6例，Ⅱ型Ⅲ期

10、6例，Ⅲ型8例。
　　 正常對照組:12例，取自2008年5月～2009年12月間我院外傷性腦脊液鼻漏患者手術(shù)修補過程中，為正常鉤突粘膜，均排除鼻-鼻竇炎及變應(yīng)性鼻炎、哮喘等變態(tài)反應(yīng)性疾病史（排除方法同鼻息肉組，并結(jié)合鼻竇CT）。
　　 通過免疫組化SP方法，檢測標(biāo)本組織中Livin，Smac及Mcm3的表達，以胞漿和/或胞核中出現(xiàn)棕黃色或棕褐色顆粒為陽性信號，應(yīng)用Olympus顯微鏡和Micro-image圖像處理系統(tǒng)

11、，每例標(biāo)本選取3張切片，每張切片均采用雙盲法隨機觀察10個高倍視野（顯微鏡下×400），用半定量積分法判斷結(jié)果，所有數(shù)據(jù)經(jīng)統(tǒng)計學(xué)處理。
　　 結(jié)果:80例標(biāo)本中，Livin表達陽性片為54例，陽性率為66.7％(54/80)，主要表達在息肉組織內(nèi)增生的腺體/腺管上皮細胞，定位于胞漿;對照組12例正常粘膜無1例陽性(0/12)。Mcm3表達陽性片為46例，陽性率為56.7％(46/80)，主要表達在息肉上皮細胞，定位于胞核。對照組

12、正常粘膜4例陽性，陽性率為33.3％(4/12)，定位于粘膜上皮細胞的胞核。Smac表達陽性為42例，陽性率為52.5％(42/80)，主要表達在息肉上皮細胞，部分腺體上皮亦可見陽性表達，定位于胞漿。對照組正常粘膜11例陽性，陽性率91.7％(11/12)，主要表達在粘膜上皮細胞，定位于胞漿。Livin，Smac在鼻息肉與正常粘膜對照組之間的表達差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。Mcm3在鼻息肉與正常粘膜對照組之間的表達差異不具有統(tǒng)計

13、學(xué)意義(P＞0.05)。Livin，Smac表達強度在鼻息肉不同臨床分型分期之間具有統(tǒng)計學(xué)上的差異(P＜0.05)，可以認為鼻息肉不同臨床分型分期中Livin,Smac表達強度是不同的。Mcm3表達強度在鼻息肉不同臨床分型分期之間不具有統(tǒng)計學(xué)上的差異(P＞0.05)。Livin、Mcm3聯(lián)合表達強度與鼻息肉臨床分型分期之間呈正相關(guān)關(guān)系(R's=0.453，P＜0.05);而Smac表達強度與鼻息肉臨床分型分期之間呈負相關(guān)關(guān)系（R's=-

14、0.429，P＜0.05）。Livin、Mcm3聯(lián)合表達強度與鼻息肉術(shù)后復(fù)發(fā)率之間呈直線正相關(guān)關(guān)系(R=0.9569，P＜0.05);而Smac表達強度與鼻息肉術(shù)后復(fù)發(fā)率之間呈直線負相關(guān)關(guān)系（R=-0.9781，P＜0.05）。
　　 結(jié)論:(1)Livin過度表達可能在鼻息肉內(nèi)腺體發(fā)生發(fā)展的過程中具有重要作用。(2)鼻息肉中存在明顯的Smac表達受阻。(3)Mcm3標(biāo)志的鼻息肉細胞增殖活性的提高在其發(fā)病機制中可能處于一個相對次