1、目的：糖尿病內(nèi)耳微血管病變是糖尿病慢性并發(fā)癥之一，對(duì)糖尿病微血管病變的發(fā)生發(fā)展機(jī)理研究形成多種學(xué)說(shuō)，主要有非酶糖化學(xué)說(shuō)、多元醇通路學(xué)說(shuō)、甘油二酯、蛋白激酶C系統(tǒng)(Diacylglycerolprotein kinaseC，DAG-PKC system)學(xué)說(shuō)及氧化應(yīng)激等，目前尚未形成一致的看法。近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)炎癥反應(yīng)過(guò)程的異常激活是糖尿病微血管損傷的主要機(jī)制，從而引發(fā)糖尿病相關(guān)并發(fā)癥的發(fā)生，在炎性反應(yīng)過(guò)程中生成的炎性因子是炎性損傷的關(guān)鍵因

2、素，但其導(dǎo)致血管及組織損傷的機(jī)制還有待進(jìn)一步的完善。VEGF亦稱血管通透因子(vascular permeability factor，VPF)，是一組分子量在34000～45000的同源二聚體糖蛋白，是內(nèi)皮細(xì)胞特異性的絲裂原，具有強(qiáng)大的促血管通透能力和促血管生成效應(yīng)。VEGF可能通過(guò)與不同的受體結(jié)合，激活不同的信號(hào)傳遞系統(tǒng)而發(fā)揮其多樣的生物學(xué)功能。VEGF主要的生物學(xué)功能如促血管內(nèi)皮細(xì)胞增生、遷移，促血管生成和增加血管通透性作用。細(xì)胞

3、間粘附分子-1(ICAM-1)是在細(xì)胞表面表達(dá)的具有介導(dǎo)細(xì)胞間或細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)相互作用的糖蛋白，它通過(guò)與其受體結(jié)合，介導(dǎo)細(xì)胞間黏附，并相互傳遞信號(hào)，參與調(diào)控細(xì)胞功能，在機(jī)體的胚胎發(fā)育，正常組織結(jié)構(gòu)的維持，炎癥與免疫應(yīng)答，傷口修復(fù)，凝血與血栓形成，腫瘤的浸潤(rùn)與轉(zhuǎn)移等多種病理生理過(guò)程中均有重要的作用。在內(nèi)耳的炎癥反應(yīng)及自身免疫反應(yīng)過(guò)程中，在多種因子的刺激下細(xì)胞間粘附分子-1(ICAM-1)表達(dá)增高，可誘導(dǎo)單核巨噬細(xì)胞粘附于血管內(nèi)皮細(xì)胞并穿

4、越血管壁游走到特定的炎性反應(yīng)部位。故研究血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)及細(xì)胞間粘附分子-1(ICAM-1)在糖尿病內(nèi)耳微血管病變中的表達(dá)及相關(guān)性，有助于探討糖尿病耳聾的發(fā)病機(jī)制，并為臨床預(yù)防及延緩糖尿病耳聾的發(fā)生提供理論依據(jù)。
　　 方法：采用血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子及血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子的免疫組織化學(xué)檢查及耳蝸毛細(xì)血管壁厚度的光鏡觀察，來(lái)分析VEGF及ICAM-1在糖尿病內(nèi)耳微血管病變中表達(dá)及其相關(guān)性。具體步驟如下：(1)動(dòng)物的選擇

5、及處理：選擇白色雌性健康的wister大鼠48只(河北醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供)，月齡2.5-3個(gè)月，體重180～220g；必須耳廓反射靈敏、耳鏡觀察鼓膜完整。按原始體重由小至大編號(hào)后，隨機(jī)分為兩組，一組為對(duì)照組(CG)以普通飼料喂養(yǎng)，二組為糖尿病組(DM)以高脂、高糖飼料喂養(yǎng)，以鏈尿佐菌素(STZ)65mg/kg腹腔注射，造糖尿病模型，注藥后動(dòng)物空腹血糖>16.65 mmol/L為造模成功。對(duì)照組大鼠一次性腹腔注射等體積不含STZ的0

6、.1mol/L檸檬酸緩沖液作為對(duì)照，以后以普通飼料喂養(yǎng)。以造模成功開(kāi)始計(jì)時(shí)，將糖尿病組大鼠隨機(jī)分為糖尿病0周(DM0)、糖尿病4周(DM4)、糖尿病8周(DM8)、糖尿病12周(DM12)及正常組分為正常組0周(CG0)、正常組4周(CG4)、正常組8周(C68)、正常組12周(CG12)，分別于0周、4周、8周、12周時(shí)取糖尿病組(DM)及對(duì)照組(CG)6只大鼠行全麻后取出耳蝸放入4％多聚甲醛中固定，4度冰箱保存?zhèn)溆谩?2)免疫組織化

7、學(xué)實(shí)驗(yàn)：取每只老鼠的雙耳于EDTA液中脫鈣10天后，梯度酒精脫水行石蠟包埋，超薄切片機(jī)切片后行免疫組化實(shí)驗(yàn)，具體步驟按照試劑盒進(jìn)行。(3)光鏡觀察。(4)數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析。
　　 結(jié)果：
　　 1、大鼠一般情況：對(duì)照組大鼠一般情況良好，活動(dòng)自如，進(jìn)食及飲水情況無(wú)明顯變化，體重持續(xù)增加；糖尿病組大鼠出現(xiàn)進(jìn)食增加、飲水增加、排泄增多、體重下降等典型的糖尿病表現(xiàn)。經(jīng)反復(fù)測(cè)試，對(duì)照組血糖均穩(wěn)定在正常范圍，糖尿病組血糖有明顯升高，說(shuō)明

8、造模成功。
　　 2、血管壁厚度的改變：對(duì)兩組大鼠在各個(gè)時(shí)期的毛細(xì)血管壁厚度進(jìn)行測(cè)量，結(jié)果以x±s表示，正常組0周時(shí)血管壁厚度平均0.094μ m±0.022μ m，4周時(shí)平均為0.097μ m±0.021μ m，8周時(shí)平均為0.10μm±0.01μm，12周時(shí)平均為0.189μm±0.03μ m，而糖尿病組血管壁明顯增厚，糖尿病組0周時(shí)平均血管壁厚度為0.11μ m±0.01μ m，4周時(shí)平均為0.145μ m±0.023μ

9、mμ m，8周時(shí)平均為0.176μ m±0.03μ m，12周時(shí)平均為0.189μ m±0.03μ m，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，兩組血管壁厚度比較有顯著性差異(P<0.05)，即糖尿病組血管壁厚度高于正常組，且隨病程的延長(zhǎng)血管壁厚度逐漸增加。
　　 3、血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子的表達(dá)，對(duì)照組，VEGF在血管紋、螺旋韌帶、螺旋器、螺旋軸及螺旋神經(jīng)節(jié)細(xì)胞有微弱的表達(dá)。在糖尿病組大鼠VEGF在血管紋、螺旋韌帶、螺旋神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的表達(dá)明顯的增強(qiáng)，且隨病

10、程的延長(zhǎng)表達(dá)輕度逐漸增加，主要在胞漿表達(dá)。糖尿病組和正常組之間表達(dá)比較(P<0.05)，差異有顯著性。VEGF表達(dá)與血管壁厚做相關(guān)性分析，兩者之間呈正相關(guān)(r=0.759，19<0.01)。
　　 4、細(xì)胞間粘附分子-1的表達(dá)：正常組ICAM-1的表達(dá)為弱陽(yáng)性，主要表達(dá)部位有螺旋韌帶及外淋巴區(qū)間皮有弱(+)ICAM-1的染色。糖尿病組ICAM-1的表達(dá)為隨病程的延長(zhǎng)表達(dá)部位增多且陽(yáng)性越來(lái)越強(qiáng)，表現(xiàn)為弱陽(yáng)性、陽(yáng)性、強(qiáng)陽(yáng)性，主要表達(dá)

11、部位有螺旋軸靜脈及其回流的小靜脈、螺旋韌帶，尤其螺旋軸靜脈及其回流的小靜脈的染色較強(qiáng)。主要在胞漿表達(dá)。糖尿病組和正常組之間有差異(P<0.05)，與血管壁厚度做相關(guān)性分析，兩者之間有相關(guān)性，(R=0.729，P<0.01)。
　　 結(jié)論
　　 1、以STZ55mg/kg一次性腹腔注射給雌性wister大鼠成功的建立了類似人類2型糖尿病的大鼠模型；
　　 2、糖尿病大鼠內(nèi)耳中的微血管病變，包括毛細(xì)血管基底膜增厚；<