1、前言
　　 大蒜是一種含有多種有機硫化合物的植物,其中最重要的有效成分之一是大蒜素。人們用大蒜來治療感染,槍傷,蛇咬,腹瀉,風濕,心臟病,糖尿病以及其它的一些生理功能紊亂,人們在實驗中還發(fā)現(xiàn)其具有降血脂、降血壓、降血糖、抗腫瘤、抗菌、抗氧化和免疫調節(jié)等功效。大蒜來源的有機硫化合物對一些人類腫瘤,如前列腺癌,胸腺癌,結腸癌,肺癌,膀胱癌等有很好的抑制作用。大蒜的化學組成十分復雜,其中有生物活性的成分超過100種。其中最重要和最獨特

2、的是有機硫化合物的含量非常高,是其他含有高硫的蔬菜如洋蔥、椰菜的4倍多。近年來日本學者發(fā)現(xiàn)在控制濕度和溫度的情況下,普通的白大蒜可以經過處理轉化為黑大蒜。黑大蒜去除了大蒜的異味,帶有甜味,口感好,無需再經處理即可直接食用。已有研究報道黑大蒜較白大蒜含有更多的氨基酸、有機硫和S-烯丙基-L-半胱氨酸,因此與白大蒜相比,更具有應用前景。然而目前有關黑大蒜對機體免疫功能影響國內外尚未見報道。為此,本實驗應用自制的黑大蒜提取物溶液,腹腔注射給小

3、鼠,觀察了黑大蒜提取物作為免疫調節(jié)劑的作用,為黑大蒜的實際應用進一步提供理論和實驗依據(jù)。
　　 實驗材料
　　 一、主要試劑
　　 黑大蒜提取物(干粉,由日本弘前大學佐佐木甚一教授惠贈),RPMI 1640培養(yǎng)基,小牛血清,0.01 M PBS緩沖液,紅細胞裂解液,LDH底物液,Griess試劑,IL-2、FN-γ、IL-4、TNF-α ELISA試劑盒。
　　 二、實驗動物
　　 BALB/c小

4、鼠,6-8周齡,SPF級,購自中科院上海實驗動物中心。
　　 實驗方法
　　 一、實驗動物分組及處理
　　 40只BALB/c小鼠隨機分為8組,其中第1-7組為實驗組,第8組為對照組。將黑大蒜提取物用生理鹽水配制成1mg/ml的溶液。實驗組每天腹腔注射100μl的黑大蒜提取物溶液,對照組每天腹腔注射100μl的生理鹽水。連續(xù)注射5天。于末次注射后的1-7天,從第1組開始,每天處死一組小鼠,第8組小鼠于第7天處死。

5、
　　 二、樣品的采集與檢測
　　 1、脾細胞分離及其懸液的制備
　　 頸椎脫位處死小鼠,常規(guī)制備脾細胞懸液,調整細胞濃度至1×107 /ml。
　　 2、ELISA法檢測脾細胞培養(yǎng)上清中Th1細胞因子IL-2、TNF-α、IFN-γ以及Th2細胞因子IL-4的水平
　　 3、LDH釋放法檢測NK細胞的殺傷活性
　　 4、Griess法檢測脾細胞培養(yǎng)上清中NO水平
　　 5、RT-

6、PCR半定量技術檢測脾細胞FasL mRNA的表達水平
　　 三、統(tǒng)計學處理
　　 實驗數(shù)據(jù)經SPSS16.0統(tǒng)計分析軟件應用t檢驗進行統(tǒng)計處理,P<0.05有顯著性差異。
　　 結果
　　 1、NK細胞殺傷活性的檢測結果
　　 在連續(xù)5天給予BALB/c小鼠注射黑大蒜提取物后,比較實驗組和對照組小鼠的NK細胞殺傷活性,結果表明:與對照組(5.82±1.38％)相比,黑大蒜提取物處理4-6天后,實

7、驗組小鼠的NK細胞殺傷活性顯著性升高,并在第5天達到峰值(11.21±1.17％),隨后下降。
　　 2、脾細胞培養(yǎng)上清中細胞因子水平的檢測結果
　　 本實驗中我們檢測了Th1型細胞因子IL-2、IFN-γ和TNF-α和Th2細胞因子IL-4的分泌水平。我們發(fā)現(xiàn)在給予小鼠連續(xù)注射5天黑大蒜提取物后,IL-2的分泌水平在處理后第6天有明顯升高,與對照組(20.14±3.88 pg/ml)相比,有顯著的統(tǒng)計學意義(P<0.0

8、5)。TNF-α的水平從處理后第1天就開始明顯升高(P<0.01),在第3天達到峰值(68.73±0.64 pg/ml),隨后下降,但一直到第7天,均高于對照組(27.36±8.30 pg/ml)。IFN-γ的分泌水平在處理結束后也有顯著升高,其中在第3天達到峰值(105.05±55.73 pg/ml),隨后下降,到第7天接近對照組水平(17.38±1.19 pg/ml)。Th2細胞因子IL-4的水平在處理后其分泌水平一直低于對照組(1

9、9.98±2.13 pg/ml),其中第3、4、5天的表達水平均顯著低于對照組(P<0.01),但是變化均在基線范圍內。
　　 3、脾細胞培養(yǎng)上清中NO含量的檢測結果
　　 從黑大蒜提取物處理后的第3天到第7天,實驗組小鼠NO2-始終處于較高的水平,與對照組相比(11.58±0.86μM),均具有顯著性差異(P<0.001)。
　　 4、脾細胞FasL mRNA表達水平的檢測結果
　　 通過半定量RT-P

10、CR技術檢測了小鼠脾細胞FasL mRNA的表達水平。處理結束后的第1天至第7天,各天脾細胞FasL mRNA的表達水平與對照組相比均未見顯著性差異(P>0.05)。
　　 結論
　　 1、黑大蒜提取物可以增強NK細胞的殺傷活性。
　　 2、FasL mRNA的表達水平并未增高,提示黑大蒜提取物未誘導殺傷細胞通過Fas/FasL,途徑發(fā)揮效應。
　　 3、黑大蒜提取物可使脾細胞NO的分泌水平明顯增高,提示