1、目的：肺癌是全球發(fā)病率最高的惡性腫瘤之一，已成為目前人類(lèi)因腫瘤死亡的主要原因，在我國(guó)農(nóng)村和城市近20年來(lái)已成為發(fā)病和死亡上升幅度最大的疾病，大多數(shù)患者就診時(shí)已喪失了手術(shù)機(jī)會(huì)，只有少數(shù)患者能進(jìn)行手術(shù)治療，因此化學(xué)治療在肺癌的治療中起著非常重要的作用。順鉑（cDDP）是目前發(fā)現(xiàn)的抗癌活性最強(qiáng)的藥物之一，被認(rèn)為是治療非小細(xì)胞肺癌（NSCLC）一線方案中最主要的組成部分，但由于其嚴(yán)重的肝腎毒性和血液系統(tǒng)毒性使其在臨床的應(yīng)用受到限制，并且存在原發(fā)

2、和繼發(fā)性耐藥，因此研發(fā)高療效低毒性的鉑類(lèi)制劑一直是學(xué)者們努力的方向，洛鉑（Lobalplatin）化學(xué)名為1，2二氨甲基-環(huán)丁烷-乳酸合鉑，是繼順鉑和卡鉑之后的第三代鉑類(lèi)衍生物，其最主要的優(yōu)點(diǎn)是治療劑量下腎毒性和血液學(xué)毒性小及較輕的胃腸道反應(yīng)，可用于乳腺癌、肺癌和慢性粒細(xì)胞白血病等的化療治療。
　　 細(xì)胞凋亡是細(xì)胞自然死亡的一種主要形式，由凋亡相關(guān)基因控制，是維持機(jī)體自身平衡的重要機(jī)制.近年研究表明，細(xì)胞凋亡受抑制參與形成腫瘤，

3、大多數(shù)化療藥物通過(guò)誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡起作用。因此對(duì)化療藥物細(xì)胞凋亡的研究具有十分重要的理論價(jià)值和臨床指導(dǎo)作用。Bcl-2是B細(xì)胞淋巴瘤/白血病-2（B-cell lymphma/leukemia-2）的縮寫(xiě)。Bcl-2對(duì)細(xì)胞凋亡有明顯的抑制作用，降低bcl-2的表達(dá)有利于細(xì)胞凋亡。Bcl-2表達(dá)降低參與化療藥物引起的細(xì)胞凋亡，因此對(duì)Bcl-2的研究成為腫瘤細(xì)胞凋亡研究的熱點(diǎn)。
　　 本實(shí)驗(yàn)以洛鉑為研究對(duì)象，以肺癌細(xì)胞株A549為模型，

4、采用MTT比色法、流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)洛鉑對(duì)肺癌細(xì)胞的增殖抑制、細(xì)胞周期阻滯、誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡等作用，應(yīng)用蛋白印跡法和免疫細(xì)胞化學(xué)法分析洛鉑對(duì)bcl-2蛋白表達(dá)的影響。為洛鉑在肺癌化療中的應(yīng)用提供相應(yīng)的理論基礎(chǔ)和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 方法：（1）取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的肺癌A549細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)分組為：空白對(duì)照組（培養(yǎng)液）；陰性對(duì)照組（培養(yǎng)液+細(xì)胞）；實(shí)驗(yàn)組（培養(yǎng)液+細(xì)胞+不同濃度洛鉑）；將各組分別培養(yǎng)24、48和72小時(shí)。
　　 （2）

5、倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況及細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化。
　　 （3）應(yīng)用MTT比色法檢測(cè)洛鉑對(duì)肺癌A549細(xì)胞增殖的影響。
　　 （4）應(yīng)用流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞周期和細(xì)胞凋亡率的變化和影響。
　　 （5）應(yīng)用蛋白印跡法分析洛鉑對(duì)Bcl-2蛋白表達(dá)的影響。
　　 （6）統(tǒng)計(jì)學(xué)處理：采用SPSS統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。
　　 結(jié)果：洛鉑能抑制肺癌A549細(xì)胞的增殖；經(jīng)洛鉑處理A549細(xì)胞后，光鏡下可見(jiàn)到明顯的

6、凋亡細(xì)胞；細(xì)胞周期的G1期前有低于二倍體細(xì)胞的凋亡峰；蛋白印跡檢測(cè)表明洛鉑可使bcl-2表達(dá)下降。
　　 （1）倒置顯微鏡下每天察陰性對(duì)照組、各度實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞大小和形態(tài)變化。陰性對(duì)照組肺癌A549細(xì)胞呈梭形，以貼壁方式生長(zhǎng)，細(xì)胞輪廓清晰，細(xì)胞間結(jié)構(gòu)緊密，生長(zhǎng)旺盛。濃度為2.5μmol/L和5μmol/L洛鉑作用24h后可見(jiàn)少量細(xì)胞變圓、體積增大，大部分細(xì)胞仍貼壁生長(zhǎng)，作用48h、72h后細(xì)胞縮小變圓，部分積聚成團(tuán)。10μmol/L

7、洛鉑作用24h后可見(jiàn)變圓細(xì)胞逐漸增多，貼壁生長(zhǎng)細(xì)胞數(shù)量減少，脫壁漂浮的小圓球細(xì)胞及細(xì)胞碎片逐漸增多，48h可見(jiàn)變圓細(xì)胞較前增多，貼壁生長(zhǎng)細(xì)胞減少，漂浮的小圓球細(xì)胞和細(xì)胞碎片增多，72h后可見(jiàn)大部分細(xì)胞積聚成團(tuán)。
　　 （2）應(yīng)用MTT比色法檢測(cè)洛鉑在不同濃度、不同時(shí)間對(duì)肺癌A549細(xì)胞株增殖的抑制作用，A549細(xì)胞出現(xiàn)明顯的增殖抑制，增殖抑制程度依賴(lài)于藥物濃度，隨濃度的升高和作用時(shí)間的延長(zhǎng)而增大，具有呈時(shí)間和劑量依賴(lài)性。

8、　　 （3）洛鉑對(duì)A549細(xì)胞周期變化的影響：洛鉑可以對(duì)肺癌A549細(xì)胞產(chǎn)生細(xì)胞周期阻滯。
　　 （4）洛鉑對(duì)A549細(xì)胞凋亡率的影響：結(jié)果表明洛鉑可以誘導(dǎo)肺癌細(xì)胞凋亡，而且隨著藥物濃度和作用時(shí)間的增加，凋亡率逐漸增加，呈時(shí)間和劑量依賴(lài)關(guān)系。
　　 （5） Western-blot檢測(cè)Bcl-2蛋白的表達(dá)可見(jiàn)隨洛鉑濃度的增高，凋亡率增高，Bcl-2的表達(dá)逐漸降低。提示我們洛鉑誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡與Bcl-2蛋白的表達(dá)有一定關(guān)