1、目的：腦出血是一種嚴(yán)重危害人類健康的疾病，腦水腫形成是導(dǎo)致腦出血病情惡化的主要因素之一。腦出血后腦水腫形成的機(jī)制是一個(gè)十分復(fù)雜的過程，迄今為止，尚未完全闡明。水通道蛋白(qauaporin，AQP)是影響水跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)和調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)外環(huán)境平衡的膜蛋白，水通道蛋白4(AQP4)是水通道蛋白家族中的一員。近年來研究結(jié)果顯示，AQP4在正常大腦和多種病理情況下水轉(zhuǎn)運(yùn)過程中發(fā)揮重要作用，尤其在腦水腫的發(fā)生發(fā)展及恢復(fù)階段扮演重要角色，日漸成為腦水腫形成

2、機(jī)制的研究熱點(diǎn)。最新研究表明 AQP4參與神經(jīng)系統(tǒng)疾病腦水腫的形成，并在腦水腫的產(chǎn)生和發(fā)展過程中起重要作用。
　　本實(shí)驗(yàn)通過建立大鼠實(shí)驗(yàn)性腦出血模型，采用免疫組織化學(xué)法、干濕重法分別檢測(cè)腦出血后血腫周圍不同時(shí)間點(diǎn)AQP4的表達(dá)及腦組織含水量的動(dòng)態(tài)變化，探討AOP4在腦出血損傷過程中表達(dá)的變化規(guī)律及其與腦水腫腦損傷的相關(guān)性，以及逐瘀安腦顆粒的干預(yù)作用，研究腦水腫的發(fā)生機(jī)制，探索有效的防治辦法。
　　方法：
　　(1)實(shí)驗(yàn)

3、動(dòng)物和分組健康成年Wistar大鼠，共100只，麻醉意外死亡10只，造?；杳詶売?只，造模成功大85只，體重250～350g，雌雄不限，SPF級(jí)（廣西藥品檢驗(yàn)所實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，許可證號(hào)SCXK桂2003-0001）。以標(biāo)準(zhǔn)飼料喂養(yǎng)。將造模成功85只大鼠隨機(jī)分成五組：即假手術(shù)組5只，對(duì)照組、逐瘀安腦顆粒小劑量組、逐瘀安腦顆粒大劑量組、尼莫地平組，每組按造模后6h、1d、3d和7d時(shí)間點(diǎn)分成4個(gè)亞組，每個(gè)亞組各5只大鼠(n=5)。

4、　　(2)腦出血模型制作及成功標(biāo)志
　　大鼠經(jīng)5％戊巴比妥鈉(40mg/kg)腹腔注射麻醉后，俯臥位固定于立體定位儀上，距尾尖0.5cm處剪尾，取50μl血，待其呈半凝狀態(tài)，用16號(hào)針頭由鉆孔刺入6mm（即右側(cè)尾狀核部位）將半凝血緩慢注入，留針10min。動(dòng)物麻醉清醒后，參照Longa法評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)，1～3分的大鼠入選本實(shí)驗(yàn)，不夠標(biāo)準(zhǔn)者拋棄，重新制模補(bǔ)充入組。
　　(3)組織切片的制備
　　動(dòng)物斷頭取腦后，以針道為中心冠狀

5、面切取血腫周圍2 mm厚的腦片。石蠟包埋，片厚4μm，進(jìn)行HE染色和免疫組化檢測(cè)；
　　(4)AQP4的檢測(cè)
　　切片經(jīng)H2O2孵育10min；羊血清室溫孵育10min；一抗為兔抗大鼠AQP4(1:200)，37℃孵育2h；SP試劑盒按說明書操作；DAB顯色，鏡下控制；陰性對(duì)照用磷酸鹽緩沖液(PBS)代替一抗進(jìn)行孵育。
　　(5)AQP4免疫組化圖像分析
　　每只大鼠共染色6張切片，AQP4免疫組化的每張切片選取

6、5個(gè)區(qū)域進(jìn)行觀察，圖像分析系統(tǒng)進(jìn)行定量分析，分析項(xiàng)目是陽(yáng)性區(qū)面積百分比。
　　(6)腦組織含水量的測(cè)定
　　采用干濕重法測(cè)定腦組織含水量，動(dòng)物斷頭取腦后，將各時(shí)間點(diǎn)的前半腦組織分別用電子分析天平稱重(濕重)，然后臵入95℃恒溫箱中，24h后取出再稱重(干重)。以(濕重-干重)/濕重×100﹪來計(jì)算腦含水量，以此代表腦水腫的水平。
　　(7)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
　　實(shí)驗(yàn)結(jié)果以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示，用SPSS13.0進(jìn)

7、行統(tǒng)計(jì)處理。采用方差分析和q檢驗(yàn)進(jìn)行分析，p<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果：
　　(1)血腫周圍腦組織形態(tài)學(xué)的改變組織切片HE染色可見腦出血后6h血腫周圍神經(jīng)細(xì)胞胞體腫脹，1-3d表現(xiàn)最明顯，細(xì)胞變形壞死，核固縮、碎裂、溶解，胞漿紅染明顯加深。7d后，細(xì)胞腫脹減輕，有少量膠質(zhì)細(xì)胞增生。AQP4主要在血腫周圍的星形膠質(zhì)細(xì)胞表達(dá)，血管周圍也呈明顯的陽(yáng)性表達(dá)。AQP4陽(yáng)性反應(yīng)產(chǎn)物主要表達(dá)在細(xì)胞膜上，強(qiáng)陽(yáng)性時(shí)胞漿可有表達(dá)，

8、細(xì)胞核不表達(dá)。光鏡下：胞膜及胞漿顯示棕黃色。
　　(2)AQP4的動(dòng)態(tài)變化
　　與假手術(shù)組相比，對(duì)照組、尼莫地平組、逐瘀安腦顆粒組均從腦出血后6h血腫周圍水腫區(qū)的神經(jīng)細(xì)胞AQP4陽(yáng)性表達(dá)明顯增加(P<0.05)，3d達(dá)到高峰(P<0.01)，7d后仍強(qiáng)于正常。
　　(3)腦組織含水量的變化
　　與假手術(shù)組相比，對(duì)照組，尼莫地平組、逐瘀安腦顆粒組腦組織含水量均在出血后6h增加(P<0.05)，3d達(dá)到峰值(P<0.

9、01)，7d明顯減輕，(P<0.05)。且逐瘀安腦顆粒組、尼莫地平組腦水腫低于對(duì)照組(P<0.05)。
　　(4)AQP4與腦組織含水量之間的相關(guān)性
　　在各時(shí)間點(diǎn)腦水腫程度與AQP4表達(dá)的變化呈顯著正相關(guān)，6h時(shí)(r=0.920，P<0.05)，1d時(shí)(r=0.952，P<0.05)，3d時(shí)(r=0.993，P<0.01)，7d時(shí)(r=0.947，P<0.05)。
　　結(jié)論：
　　(1)腦出血后血腫周圍AQP4