1、目的：研究特異性環(huán)氧化酶-2(COX-2)抑制劑塞來昔布對人肝癌細(xì)胞株SMMC-7721和人胃癌細(xì)胞株MKN-45是否有抑制增殖、誘導(dǎo)凋亡作用并初步探討其作用機(jī)制。 方法： 1、體外培養(yǎng)人肝癌細(xì)胞株SMMC-7721和人胃癌細(xì)胞株MKN-45，每種細(xì)胞分七組，分別予0、5、10、25、50、75、100μmol/L濃度的塞來昔布干預(yù)后，倒置相差顯微鏡觀察各組細(xì)胞形態(tài)的變化； 2、采用四氮唑鹽比色法(MTT法)觀察

2、不同濃度的塞來昔布作用后，細(xì)胞增殖活力的改變； 3、流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞凋亡率及細(xì)胞周期變化； 4、免疫細(xì)胞化學(xué)法觀察Bcl-2蛋白和Bax蛋白表達(dá)變化情況： 5、透射電鏡觀察細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的改變； 6、：DNA凝膠電泳技術(shù)觀察凋亡細(xì)胞變化。 結(jié)果： 1、倒置相差顯微鏡顯示隨著塞來昔布濃度增加和時(shí)間延長，細(xì)胞增殖變慢，體積變小，變圓、漂浮的比例明顯增大； 2、MTT法顯示隨著塞來昔布濃

3、度和作用時(shí)間增加，細(xì)胞抑制率上升。人肝癌細(xì)胞株SMMC-7721在25、50、75、100μmol/L塞來昔布濃度下，24小時(shí)細(xì)胞抑制率分別為15.41±3.11％、34.56±2.41％、56.80±1.01％、86.15±0.43％，48小時(shí)抑制率分別為33。45±0.66％、66.72±1.77％、76。14±2.43％、97.27±0.80％。人胃癌細(xì)胞株MKN.45在25、50、75、100μmol/L塞來昔布濃度下，24小時(shí)

4、細(xì)胞抑制率分別為16.39±1.43％、23.55±0.11％、62.78±1.42％、87.53±0.27％，48小時(shí)細(xì)胞抑制率分別為30.40±0.68％、46.18±1.80％、89.77±0.21％、97.94±0.18％，(P<0.05)； 3、流式細(xì)胞儀測定塞來昔布組出現(xiàn)凋亡峰，50、100μmol/ml濃度的塞來昔布干預(yù)24小時(shí)后，人肝癌細(xì)胞株SMMC-7721凋亡率分別為14。567±1.06％、40.467±2

5、.0％，人胃癌細(xì)胞株MKN-45凋亡率分別為25.5±2.66％、57.23±2.19％； 4、免疫細(xì)胞化學(xué)法顯示經(jīng)塞來昔布干預(yù)后，凋亡蛋白Bax表達(dá)增加，而Bcl-2表達(dá)減少，并隨時(shí)間和藥物濃度變化而明顯： 5、透射電鏡觀察顯示塞來昔布組細(xì)胞呈凋亡表現(xiàn)，核固縮、碎裂，染色質(zhì)濃縮，邊集，有凋亡小體形成；6、塞來昔布(50μmol/L、100μmol/L)組培養(yǎng)48小時(shí)后DNA瓊脂糖凝膠電泳可見典型的梯狀條帶，而對照組細(xì)胞