1、本文對十字花科蔬菜重要害蟲——小菜蛾P(guān)lutellaxylostella(Linnaeus)蛹的優(yōu)勢種寄生蜂頸雙緣姬蜂Diadromuscollaris(Gravenhorst)對寄主的生理調(diào)控機(jī)制進(jìn)行了研究，初步了解了寄生及毒液在其中的作用。取得了以下結(jié)果： 一、頸雙緣姬蜂雌性生殖系統(tǒng)觀察及毒液器官超微結(jié)構(gòu) 通過透射電鏡觀察，頸雙緣姬蜂卵巢液流內(nèi)不含病毒顆粒。通過光學(xué)顯微鏡觀察，卵巢組織不含卵萼區(qū)，毒液器官由一個囊狀的

2、毒液囊及其頂上兩根線狀的毒液腺組成，毒液通過一根小導(dǎo)管從毒液囊流入輸卵管。 對毒液腺橫切面超薄切片的透射電鏡觀察發(fā)現(xiàn)，毒液腺組織由內(nèi)到外依次是由毒液腺腔、圍繞腺腔的幾丁質(zhì)層、導(dǎo)管細(xì)胞、分泌細(xì)胞和基膜組成。分泌細(xì)胞結(jié)構(gòu)復(fù)雜，是組成腺體的主要部分，它內(nèi)含豐富的電子密度的分泌性小囊、各種細(xì)胞器、一個輻射狀結(jié)構(gòu)的末端細(xì)胞器和其相連的角質(zhì)狀導(dǎo)管，通過它們將分泌性小囊中的毒蛋白輸送到腺腔中。通過對不同年齡階段的毒腺結(jié)構(gòu)觀察，發(fā)現(xiàn)這些分泌細(xì)胞

3、有一個發(fā)生、成熟和衰老的過程。 通過對毒液囊橫切面的透射電鏡觀察發(fā)現(xiàn)，囊壁由內(nèi)到外依次是由圍繞囊腔腔的幾丁質(zhì)層、細(xì)胞層、肌肉層和基膜組成。毒液囊壁的細(xì)胞層結(jié)構(gòu)分為兩種類型，一種是具有分泌細(xì)胞和導(dǎo)管細(xì)胞結(jié)構(gòu)的分泌性單元組成，另一種由上皮細(xì)胞組成。囊壁的分泌性單元相似于毒液腺管部分的分泌性單元，但結(jié)構(gòu)比后者要簡單。毒液囊的細(xì)胞結(jié)構(gòu)也表現(xiàn)出與毒液細(xì)胞相同的變化規(guī)律。 二、頸雙緣姬蜂毒液蛋白生化特性及抗菌活性 頸雙緣姬蜂

4、每個毒液囊的蛋白含量為0.4μg，毒液蛋白的分子量范圍為8-75kDa，其中32.5、28.2、25.1和9kDa的多肽含量較高。通過糖蛋白染色發(fā)現(xiàn)，毒液中含有極微量的糖蛋白，分子量為75kDa。毒液具有抗埃希大腸桿菌的活性，在細(xì)菌的平板培養(yǎng)時，當(dāng)毒液量為20個毒液囊量時，細(xì)菌的生長被完全抑制，當(dāng)毒液量為10個毒液囊的量時，細(xì)菌的生長被部分抑制，而當(dāng)毒液用量為2個毒液囊當(dāng)量時細(xì)菌的生長不受影響。通過液體培養(yǎng)的毒液抗細(xì)菌活性分析得出，毒液

5、對細(xì)菌的最低生長抑制濃度(MIC)為0.2-0.8μg/μl。 三、頸雙緣姬蜂寄生及假寄生對小菜蛾蛹免疫因子的影響 寄生及假寄生能引起寄主總血細(xì)胞及兩種主要類型血細(xì)胞(漿血細(xì)胞和顆粒血細(xì)胞)數(shù)量的大量上升，寄生還能引起顆粒血細(xì)胞和漿血細(xì)胞延展行為的抑制。假寄生抑制了小菜蛾蛹血淋巴的酚氧化酶活性和蛹血淋巴對SephadexG-100珠子的包囊。假寄生引起小菜蛾蛹對真菌(綠僵菌)的感染率增加。 四、頸雙緣姬蜂毒液對小

6、菜蛾幼蟲免疫因子的影響 0.04VRE/μl的毒液對小菜蛾幼蟲血細(xì)胞延展行為和活性產(chǎn)生影響。毒液能明顯地抑制漿血細(xì)胞的延展，對顆粒血細(xì)胞的延展也有一定的影響。毒液與血細(xì)胞共同孵育3h后，對照顆粒血細(xì)胞延展率為99±1％，而加毒液處理組則下降至50±3％；毒液對小菜蛾漿血細(xì)胞延展率的抑制更明顯，使它下降至5％。毒液同樣對漿血細(xì)胞和顆粒血細(xì)胞的活性產(chǎn)生明顯的影響。當(dāng)血細(xì)胞孵育3h后再加入毒液，在孵育3小時后觀察，顆粒血細(xì)胞從對照未加

7、毒液處理的99±1％下降至50±3％，對漿血細(xì)胞存活率的抑制更明顯，使它下降至20±1％。通過毒液對血細(xì)胞毒性的分析發(fā)現(xiàn)，毒液與血細(xì)胞共同孵育3.5h后，血細(xì)胞出現(xiàn)空泡的癥狀。另外，毒液抑制了小菜蛾幼蟲血淋巴在體外對L—多巴的黑化，但是隨著時間的推移與對照的差異不明顯。 毒液抑制了小菜蛾幼蟲血細(xì)胞在體外對埃希大腸桿菌的吞噬。400、80或4ng/μl毒液的處理，使參與吞噬反應(yīng)的血細(xì)胞分別比對照降低了75±5％，30±8％和10±

8、2％。毒液通過影響血細(xì)胞的活性而抑制了對大腸桿菌的吞噬。 五、頸雙緣姬蜂毒液對非適合寄主幼蟲活性免疫因子的影響 0.04VRE/μl毒液對菜青蟲菜粉蝶幼蟲和玉米螟幼蟲的血細(xì)胞延展率沒有影響，與對照相近。毒液對菜青蟲菜粉蝶幼蟲血細(xì)胞的存活率產(chǎn)生影響，漿血細(xì)胞和顆粒血細(xì)胞的存活率分別為73±4％和65±2％，而對玉米螟幼蟲的血細(xì)胞存活率沒有影響。毒液對菜粉蝶幼蟲血淋巴體外黑化能力有一定的抑制，對玉米螟幼蟲血淋巴的體外黑化能力

9、沒有影響。 六、頸雙緣姬蜂寄生及假寄生對小菜蛾蛹營養(yǎng)狀態(tài)的影響 寄生和假寄生引起小菜蛾蛹脂肪體內(nèi)脂類和蛋白濃度下降，同時由于幼蜂的取食，寄生處理的小菜蛾蛹寄生后1.5天開始脂肪體內(nèi)脂類和蛋白濃度的下降更多。假寄生使小菜蛾蛹血淋巴脂含量比對照要高，寄生處理在前期血淋巴脂濃度與假寄生處理相近，從寄生后2天開始，由于幼蜂的取食，血淋巴脂濃度比對照要低；血淋巴蛋白濃度假寄生與對照相近，寄生處理在前期血淋巴蛋白濃度與假寄生處理相近

10、，從寄生后2天開始，由于幼蜂取食，血淋巴蛋白濃度比對照要低。 幼蜂在剛孵化時脂濃度處于較低的水平，隨后逐漸增高，至寄生后3.5d時有一個較大的增長量，至5.5d時增加更快。 七、頸雙緣姬蜂寄生及假寄生對小菜蛾蛹脂肪體組織結(jié)構(gòu)的影響 從脂肪體光學(xué)形態(tài)的觀察來看，假寄生與寄生后，脂肪組織從外周開始松散，脂肪細(xì)胞分散到寄主的血腔中，寄生后這種現(xiàn)象更明顯。從脂肪體的半薄切片來看，寄生后，，而外周的脂肪體細(xì)胞的著色較淺，細(xì)

11、胞內(nèi)含物少，細(xì)胞內(nèi)呈現(xiàn)出空洞。被假寄生的蛹脂肪體細(xì)胞的著色位于兩者之間。從透射電鏡下觀察發(fā)現(xiàn)，寄生后的脂肪體細(xì)胞間隙增大，細(xì)胞內(nèi)蛋白顆粒數(shù)量減少，且著色深淺不一，同時脂滴數(shù)量也減少。寄生加速脂肪體細(xì)胞的自噬分解過程，很多蛋白顆粒內(nèi)的貯存物質(zhì)被自噬體分解成細(xì)小的顆粒。細(xì)胞膜上出現(xiàn)一些被溶解的缺口，脂肪體細(xì)胞的貯存物質(zhì)一部分通過被分解的細(xì)小的顆粒的形式被分泌出來，另一部分以大的顆粒通過細(xì)胞膜的裂口直接游離到血淋巴。被假寄生的小菜蛾蛹內(nèi)脂肪體