1、分別從細(xì)胞水平、分子水平及動(dòng)物實(shí)驗(yàn)來(lái)探索二膦酸鹽在防治人工關(guān)節(jié)松動(dòng)中的作用及作用機(jī)制.方法:1 細(xì)胞水平:收集小鼠骨髓細(xì)胞于含有10<'-8>mol/L的1,25二羥基維生素D<,3>[1,25-(OH)<,2>D<,3>的α-MEM完全培養(yǎng)基中體外培養(yǎng),誘導(dǎo)骨髓細(xì)胞生成破骨細(xì)胞,設(shè)置不同濃度的阿倫膦酸鈉給藥,并于培養(yǎng)的第6,9,12天觀察記錄抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate-resistant acid phosphatase,T

2、RAP)陽(yáng)性多核巨細(xì)胞[破骨樣細(xì)胞(osteoclast-like cell,OLC)]生成數(shù),反映破骨細(xì)胞生成情況.記數(shù)培養(yǎng)12天骨磨片上骨吸收陷窩數(shù)及吸收面積,反映骨吸收情況.2 分子水平:分離培養(yǎng)人外周血單個(gè)核細(xì)胞,分成5組.A組:對(duì)照組,僅單核細(xì)胞.B組:關(guān)節(jié)磨屑組;培養(yǎng)細(xì)胞中加入超高分子量的聚乙烯顆粒(ultrahigh molecuar weight polyethylene,UHMWPE).C組:B+10<'-4>mol/

3、L的阿倫膦酸鈉.D組:B+10<'-5>mol/L的阿倫膦酸鈉.E組:B+10<'-6>mol/L的阿倫膦酸鈉.培養(yǎng)24小時(shí),ELISA法檢測(cè)細(xì)胞上清中IL-1β、IL-6及TNF-α含量,提取各組細(xì)胞總RNA,用RT-PCR檢測(cè)各組骨吸收因子IL-6及TNF-α基因的表達(dá),原位雜交方法檢測(cè)IL-1βmRNA的表達(dá).3 動(dòng)物實(shí)驗(yàn):建立人工關(guān)節(jié)松動(dòng)的動(dòng)物模型,設(shè)立實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組,實(shí)驗(yàn)組每日阿倫膦酸鈉灌胃,用藥8周后,對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組組織切片