重組腺病毒介導Pr-39與BMP-9共轉雜C3H10T1-2細胞的實驗研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的: 構建并擴增攜帶紅色熒光蛋白的抗菌肽PR-39的重組腺病毒載體(AdPR-39)及攜帶綠色熒光蛋白的骨形態(tài)發(fā)生蛋白-9(BMP-9)的重組腺病毒載體(AdBMP-9)，AdPR-39與AdBMP-9共轉染間充質干細胞C3H10T1/2，檢測PR-39及BMP-9在C3H10T1/2細胞中的表達及生物活性。
　　方法: PCR擴增PR-39片段，亞克隆至pAdTrack-TO4質粒，構建重組穿梭質粒pAdTrack-TO4-

2、PR-39，經(jīng)雙酶切及測序鑒定。pAdTrack-TO4-PR-39經(jīng)PmeⅠ酶切，轉化感受態(tài)AdEasier細胞，構建重組腺病毒質粒pAdPR-39。pAdPR-39經(jīng)PacⅠ酶切后轉染至HEK293獲得重組腺病毒AdPR-39并進行擴增。擴增重組腺病毒AdBMP-9。將重組腺病毒AdPR-39及AdBMP-9感染間充質干細胞C3H10T1/2，通過熒光顯微鏡觀察、RT-PCR及western blot鑒定目的蛋白的表達，同時檢測PR

3、-39的抗菌活性。
　　結果: pAdTrack-TO4-PR-39及pAdPR-39構建成功;AdPR-39包裝成功，AdPR-39及AdBMP-9成功擴增。 AdPR-39及AdBMP-9成功感染C3H10T1/2細胞，且表達了PR-39及BMP-9蛋白。轉染含PR-39的細胞的上清液能有效抑制金黃色葡萄球菌的生長，計算其抑菌率為96.1％。
　　結論: 成功構建攜帶紅色熒光蛋白的PR-39重組腺病毒載體。通過重組腺病

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