1、羊痘（Capripox）是由羊痘病毒（Capripoxvirus）引起的羊的一種急性、熱性、接觸性傳染病，被世界動物衛(wèi)生組織列為必須報告的動物疫病。羊痘病毒為痘病毒科（Poxviridae）脊椎動物痘病毒亞科（Chordopoxvirinae）羊痘病毒屬（Capripoxvirus）成員，包括綿羊痘病毒（Sheeppox virus）、山羊痘病毒（Goatpox virus）和牛結節(jié)性疹塊病病毒（Lump skin disease vi

2、rus）。
　　干擾素（IFN）誘導的雙鏈RNA依賴的蛋白激酶（double-stranded RNA-dependent protein kinase, PKR）是哺乳動物4種絲氨酸/蘇氨酸激酶之一（其他3個分別為HRI，GCN2和PERK），它能夠識別細胞應激和病毒感染，并作用于真核起始因子eIF2α，使其發(fā)生磷酸化，從而抑制病毒蛋白的合成。
　　羊痘是動物痘病中十分嚴重的一種，目前關于PKR對羊痘病毒作用的研究甚少。本

3、研究通過檢測綿羊痘病毒（SPPV）感染后細胞內PKR-eIF2α的變化，檢測過表達及通過RNA干擾技術下調PKR蛋白表達后對SPPV復制的影響，驗證SPPV K3L蛋白與PKR之間的相互作用，旨在綜合評價PKR在細胞抗羊痘病毒復制中的作用。
　　1、 SPPV感染后對細胞內PKR-eIF2α的影響的研究。
　　SPPV感染HeLa細胞，通過Western-blot方法檢測細胞內PKR及eIF2α蛋白水平及其磷酸化水平的變化，

4、結果表明：SPPV感染能夠引起PKR及eIF2α磷酸化水平明顯升高，且具有劑量相關性，而經(jīng)過紫外滅活的SPPV未能激活PKR通路。說明PKR的激活需要SPPV在細胞內的復制，復制過程中產(chǎn)生的dsRNA是PKR的活化劑。
　　2、細胞感染SPPV后PKR的作用研究。
　　為了驗證PKR在細胞感染SPPV后的作用，本研究進行了PKR過表達或利用RNA干擾技術下調PKR蛋白表達，接種SPPV GL毒株后檢測病毒蛋白的表達及SPPV

5、的復制。結果發(fā)現(xiàn)：在PKR過表達的HeLa細胞中，SPPV GL毒株病毒的復制水平比對照組細胞降低，病毒蛋白表達下降；而PKR沉默則促進了病毒的復制。證明PKR對細胞內的SPPV復制有抑制作用。
　　3、 PKR在SPPV感染過程中誘導干擾素的產(chǎn)生的研究。
　　本試驗通過實時熒光定量PCR檢測PKR下調后接種SPPV細胞內IFN-βmRNA水平。結果顯示：與對照組相比，PKR蛋白表達下調的細胞中，IFN-βmRNA水平顯著降

6、低，證明PKR能夠誘導IFN-β的產(chǎn)生。
　　4、 PKR與羊痘病毒K3L蛋白作用關系的研究。
　　痘苗病毒的K3L蛋白在結構上與PKR的自然底物eIF2α相似，可作為“假底物”與PKR結合，從而抑制PKR的作用。為了確定羊痘病毒的K3L蛋白是否也與PKR存在相互作用，本研究通過間接免疫熒光和免疫共沉淀試驗證明了羊痘病毒K3L蛋白與細胞內的PKR重合表達，且蛋白定位在細胞核，并通過Western-blot方法確定了兩者存在相