1、眼局部用藥是治療眼科疾病的主要手段之一。多年來,眼用劑型多是溶液劑,混懸劑和半固體制劑。這些傳統(tǒng)劑型的主要缺點是眼部的生物利用度很低。由于眼球的運動和鼻淚系統(tǒng)的作用使藥物在角膜前停留時間很短,角膜的屏障作用以及藥物本身的理化性質(zhì)也使藥物的跨角膜轉(zhuǎn)運受到限制,通常小于5％的藥物能夠進入到眼睛的前房組織(如房水等),而分配到后房組織(晶體、玻璃體等)的藥物則更少。因此,滴眼液需多次反復(fù)給藥,應(yīng)用很不方便,特別是對于眼科手術(shù)后的患者。所以研究

2、新型眼部藥物載體以改善眼部的吸收、提高眼部生物利用度是非常必要的。 立方晶(Cubosomes,CS)是兩親性脂質(zhì)和表面活性劑在水中自發(fā)形成的雙連續(xù)相的立方液晶的納米分散體系,屬于自穩(wěn)定體系。立方液晶在控釋藥物和蛋白質(zhì)具有很大的優(yōu)勢,這是因為其獨特的脂水雙連續(xù)相和雙水通道結(jié)構(gòu),能夠同時增溶親水、親脂及兩親性分子；非特定脂酶的生物可降解性；高生物粘附性；溫和的制備工藝,可高壓高溫滅菌。近期研究發(fā)現(xiàn)其雙連續(xù)型結(jié)構(gòu)與人體皮膚角質(zhì)層的生

3、物相似性,這可能是立方晶在透皮釋藥中具有促透作用的原因。因此,我們首次嘗試將其用于與皮膚角質(zhì)層結(jié)構(gòu)相似的眼角膜。 本實驗首次制備環(huán)孢素A(cyclosporine A,CysA)的立方晶,并首次將其用于眼部角膜給藥,評價其角膜穿透特性。同時,制備了CysA的微乳凝膠和納米粒兩種膠體分散體系,結(jié)合常用的橄欖油溶液,體外評價了角膜透過能力,考察多種膠體劑型對CysA角膜透過的影響。 首先建立了離體透角膜釋放實驗中接受液和角膜

4、中CysA的HPLC測定方法?？疾焖幬餄舛葘ysA透角膜行為的影響,發(fā)現(xiàn)隨著給藥劑量(濃度)的增加,藥物累計透過量和透過速率增大,但是藥物角膜透過系數(shù)減小。 根據(jù)偽三元相圖篩選適宜的眼用微乳凝膠處方,最終采用亞油酸乙酯/吐溫80/甘油/水系統(tǒng),選擇吐溫80：甘油(2:1)和吐溫80：甘油(3:1)處方中的凝膠區(qū)域,采用自微乳化方法制備含1％CysA的眼用微乳凝膠。CysA的測定波長為214nm,接近紫外區(qū),微乳輔料對其測定的干

5、擾較大,所以我們采用反相高效液相色譜法測定其含量。 研究了納米沉淀法制備納米粒的工藝。通過單因素試驗設(shè)計考察了有機溶劑、水相與有機相體積比、PLGA濃度、藥物濃度、攪拌速率、溶劑揮發(fā)溫度對粒徑、載藥量以及包封率的影響。結(jié)果表明,納米粒制備中的有機溶劑、水相與有機相體積比、PLGA濃度對納米粒的粒徑有明顯影響,可以通過改變這些因素來控制微球的粒徑。有機相中PLGA濃度和藥物濃度對納米粒包封率影響明顯。我們優(yōu)選處方工藝,用納米沉淀法

6、制得納米粒粒徑為140nm,載藥量為4.8％,包封率為79.5％。 我們采用高壓均質(zhì)的方法,以MO/F127/H2O制備了立方晶分散體系。并制備含1％CysA(w/w)的立方晶分散體系。利用冷凍透射電鏡、小角度X射線衍射和原子力顯微鏡確證了立方晶結(jié)構(gòu)。馬爾文動態(tài)激光光散射法測得空白立方晶的粒經(jīng)為173.1nm,多分散系數(shù)0.175;含藥立方晶粒經(jīng)為193.5 nm,多分散系數(shù)0.199,呈對數(shù)正態(tài)分布。凝膠微柱離心法可有效的分離

7、包封藥物和游離藥物,適用于包封率的測定,包封率均可達到90％以上。HPLC法測定含量。以溫度加速實驗考察了立方晶分散體系的穩(wěn)定性,空白、0.5％CysA和1％CysA立方晶分散體系在60℃時放置10天,保持穩(wěn)定。以粘度為表征,初步討論了含水量增加體系由層狀液晶到立方液晶到立方晶的轉(zhuǎn)變。 以CysA橄欖油溶液為對照制劑,采用離體家兔眼角膜對微乳凝膠、納米粒和立方晶分散體系的角膜滲透性進行了研究,在給藥6h以后還考察了角膜中藥物的貯

8、存量。結(jié)果表明,CysA立方晶和納米粒分散體的累計透過量都比對照橄欖油溶液組高(P<0.05),角膜透過速率分別是對照橄欖油溶液組的1.52倍和1.48倍(兩組之間沒有顯著差異P>0.05);立方晶組的角膜貯存藥量明顯高于其他各組(P<0.01),為橄欖油組的2.2倍。但兩個微乳凝膠處方的角膜滲透性和貯存藥量均低于橄欖油滴眼液(P<0.01)。 考察了三種制劑對家兔角膜的刺激,結(jié)果CysA的立方晶和納米分散體基本無刺激性,兩個處

9、方的微乳凝膠和橄欖油溶液對眼部都有一定的刺激性。 首先建立了家兔眼角膜和房水的LC-MS測定方法。采用Kromasil C18(2.1×150mm,5μm)柱,流動相為乙腈：10mM醋酸銨(pH5.3)=90:10,流速為0.2ml.min-1,進樣量為5μL。質(zhì)譜電離方式:ESI+;掃描方式:SIM;用于定量的離子:m/z 1224.8(CysA)和m/z 1238.8(CysD)。藥代動力學(xué)研究,24只家兔,分別多劑量應(yīng)用環(huán)

10、抱素橄欖油溶液和立方晶分散體系,于用藥后不同時間點處死家兔,抽取房水,分離角膜并稱重,采用LC-MS法分別測定房水和角膜中藥物含量。結(jié)果立方晶組較橄欖油組吸收快,消除慢,生物利用度高出約50％；角膜貯存藥量初期高于橄欖油組,后期兩者近似。 以LEWIS大鼠作為受體,WISTAR大鼠作為供體,建立了原位角膜移植排斥模型,觀察抑制大鼠角膜移植排斥反應(yīng)的療效。動物被隨機分成3組,第一組為空白對照組,術(shù)后不接受CysA治療；第二組術(shù)后給

11、予1％CysA橄欖油滴眼液；第三組給予1％CysA立方晶分散體。角膜移植手術(shù)后,即進行眼局部給藥,劑量為每次20μL,每天5次,10天以后每天3次。術(shù)后第1天開始,每天將在裂隙燈下檢查植片,觀察兩周,以后每周觀察2-3次,觀察4周,同時觀察其角膜植片的存活時間。對角膜渾濁,水腫及新生血管3項指標按照Hooland方法進行評分,同時進行植片的組織病理學(xué)檢查。結(jié)果表明,1％CysA立方晶分散體可顯著降低大鼠角膜移植的排斥反應(yīng)發(fā)生率(立方晶分

12、散體組為37.5％,空白對照組為62.5％,橄欖油溶液為50％)。組織病理學(xué)檢測結(jié)果顯示,未處理組的植片內(nèi)有大量炎性細胞浸潤,多數(shù)為淋巴細胞,并能見到角膜基質(zhì)層的新生血管,應(yīng)用環(huán)飽素立方晶組的角膜植片內(nèi)浸潤的細胞明顯少于未處理組。提示環(huán)抱素立方晶可有效抑制大鼠角膜移植后的排斥反應(yīng),療效優(yōu)于橄欖油滴眼液。 用FITC作為熒光標記物,制備了0.03％FITC立方晶,以0.03％FITC橄欖油溶液作為對照,在體外透家兔角膜0.5h,1