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文檔簡介
1、人類8型皰疹病毒(Human herpesvirus8,HHV-8),又名卡波西肉瘤相關病毒(Kaposi’s sarcoma-associated herpesvirus,KSHV),HHV-8在宿主細胞內所存在的狀態(tài)不同,可分為潛伏感染階段和裂解復制階段。其中ORF45是由立即早期基因編碼的γ型皰疹病毒所特有的蛋白,它能夠與干擾素調節(jié)因子7(Interferonregulator factor7,IRF-7)相互作用,抑制IRF-7
2、的磷酸化和入核,抑制了Ⅰ型干擾素的表達,從而使得病毒逃避宿主的免疫應答。另外,ORF45在病毒建立潛伏態(tài)以及進入裂解復制的過程中也發(fā)揮了重要作用。ORF72基因屬于潛伏期基因,無內含子,編碼的是病毒周期蛋白(v-cyclinD),與細胞周期蛋白D2相似性為64%,病毒所編碼的細胞周期蛋白具有雙重作用,一方面表現(xiàn)出宿主細胞G1期周期蛋白的特點,另一方面又能使宿主細胞周期失調。
本文以pET28a作為載體,構建了pET28a-
3、ORF45(1-238 aa)和pET28a-ORF72(1-198 aa)表達質粒,并分別轉化大腸桿菌BL21(DE3),ORF45(1-238 aa)蛋白和ORF72(1-198 aa)蛋白在IPTG濃度為0.1 mmol/L,37℃,誘導時間為4 h的條件下均能大量表達。在此基礎上,利用Ni親和層析的方法純化ORF45(1-238 aa)蛋白和ORF72(1-198 aa)蛋白。以純化的ORF45(1-238 aa)蛋白和ORF7
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