1、目的：腎臟疾病以炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)及纖維化為主要特征，而腎臟間質(zhì)纖維化被認(rèn)為是導(dǎo)致終末期腎功能衰竭的最終途徑，其間伴有腎小球系膜細(xì)胞和成纖維細(xì)胞活化、炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)、細(xì)胞凋亡以及基底膜擴(kuò)張等，但根本原因還是炎癥反應(yīng)的發(fā)展。而作為炎癥細(xì)胞中重要成員的肥大細(xì)胞（mast cell，MC）可能通過(guò)多種途徑在腎間質(zhì)纖維化中起著不可忽視的作用。目前中藥抑制腎間質(zhì)纖維化作用機(jī)制研究中尚未開(kāi)展對(duì)肥大細(xì)胞作用的相關(guān)研究。研究評(píng)價(jià)延腎口服液（YSH）抑制肥大細(xì)胞

2、脫顆粒對(duì)腎間質(zhì)纖維化的療效，有可能從肥大細(xì)胞環(huán)節(jié)為腎纖維化的防治提供一條新的途徑，為臨床開(kāi)發(fā)預(yù)防和治療腎間質(zhì)纖維化提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。本實(shí)驗(yàn)研究自組中藥復(fù)方Y(jié)SH抑制UUO模型大鼠腎間質(zhì)纖維化作用，并從肥大細(xì)胞角度探討YSH對(duì)腎間質(zhì)纖維化抑制作用的可能機(jī)制。
　　 方法：
　　 （1）研究模型及動(dòng)物分組：采用大鼠單側(cè)輸尿管梗阻（unilateral ureteric obstruction，UUO）模型作為腎間質(zhì)纖維化研究模型

3、。隨機(jī)選取75只健康雄性SD大鼠作為研究樣本，體重150±20g，分為以下5組（每組15只）：UUO組（模型對(duì)照）；手術(shù)對(duì)照組（假手術(shù)組/Sham組）；UUO+貝那普利（陽(yáng)性對(duì)照）組；UUO+低劑量YSH治療組；UUO+高劑量YSH治療組。在無(wú)菌條件下行左側(cè)輸尿管結(jié)扎術(shù)。手術(shù)對(duì)照組開(kāi)腹后，分離出左側(cè)輸尿管，但不結(jié)扎，其余步驟相同。術(shù)前1日開(kāi)始給藥，UUO組、手術(shù)對(duì)照組給予2.1ml/d生理鹽水灌胃，每日一次，貝那普利組給予2.5ml/d

4、，YSH高、低劑量治療組分別給予2.1ml/d、1.05ml/d灌胃，于手術(shù)后六周（第42天）收集標(biāo)本。
　　 （2）病理學(xué)檢測(cè)及評(píng)價(jià)：取梗阻側(cè)腎組織行HE染色觀(guān)察腎間質(zhì)病理學(xué)變化，采用Banff標(biāo)準(zhǔn)評(píng)定腎間質(zhì)纖維化程度。
　　 （3）纖維化腎組織中肥大細(xì)胞數(shù)量和分布特點(diǎn)研究：采用甲苯胺蘭染色和免疫組化方法檢測(cè)腎組織中類(lèi)胰蛋白酶（Tryptase，肥大細(xì)胞膜表面特異表達(dá)）表達(dá)。
　　 （4）纖維化腎組織中肥大細(xì)胞

5、超微結(jié)構(gòu)和脫顆粒狀態(tài)研究：借助透射電鏡下觀(guān)察纖維化腎組織中肥大細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)特點(diǎn)。
　　 （5）腎組織中轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1（TGF-β1）及α-平滑肌肌動(dòng)蛋白（α-SMA）表達(dá)水平檢測(cè)：采用免疫組化方法檢測(cè)纖維化腎組織TGF-β1和α-SMA的表達(dá)變化，并進(jìn)行半定量病理圖像分析。
　　 （6）實(shí)驗(yàn)大鼠腎功能檢測(cè)及24小時(shí)尿蛋白定量測(cè)定：留取血、尿標(biāo)本做血肌酐（SCR）、尿肌酐（UCR）、血尿素氮（BUN）、尿尿素氮（UUN

6、）及24小時(shí)尿蛋白定量測(cè)定。
　　 （7）統(tǒng)計(jì)學(xué)方法所有數(shù)據(jù)資料采用（X±s）表示，采用SPSS12.0統(tǒng)計(jì)軟件處理。多組間均數(shù)經(jīng)方差齊性檢驗(yàn)后應(yīng)用單因素方差分析。相關(guān)性采用PEARSON直線(xiàn)相關(guān)分析。
　　 結(jié)果：
　　 （1）實(shí)驗(yàn)大鼠腎間質(zhì)纖維化病理變化：UUO術(shù)后6周，各組大鼠表現(xiàn)不同程度的梗阻側(cè)腎臟腫大，腎實(shí)質(zhì)變薄，腎盂腎盞擴(kuò)大。光鏡下觀(guān)察手術(shù)對(duì)照組大鼠腎臟無(wú)明顯病理改變，UUO組顯示腎小管間質(zhì)中炎癥細(xì)胞

7、增多，小管細(xì)胞呈現(xiàn)不同程度的變性、萎縮及壞死，小管周?chē)I間質(zhì)增寬，YSH高、低劑量治療組和貝那普利組表現(xiàn)部分腎小管輕度擴(kuò)張，病變程度輕于UUO組，而各組腎小球均未見(jiàn)明顯病理變化。
　　 （2）肥大細(xì)胞形態(tài)學(xué)特點(diǎn)和超微結(jié)構(gòu)特征：甲苯胺蘭染色和Tryptase染色結(jié)果顯示，肥大細(xì)胞主要分布在腎間質(zhì)血管周?chē)cUUO組相比，YSH高、低劑量治療組和貝那普利組大鼠肥大細(xì)胞數(shù)量顯著減少（P<0.05），透射電鏡觀(guān)察，UUO組脫顆粒的肥大細(xì)

8、胞形狀不規(guī)則，電子密度降低，著色不均勻，胞質(zhì)中有空泡出現(xiàn)，膜表面微絨毛狀突起增多，失去完整胞膜結(jié)構(gòu)，YSH高、低劑量組和貝那普利組與UUO組相比，肥大細(xì)胞體積較大，未見(jiàn)顆粒脫出。
　　 （3）腎組織TGF-β1、α-SMA表達(dá)水平：UUO組和各治療組TGF-β1、α-SMA表達(dá)均明顯增多，與手術(shù)對(duì)照組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）；與UUO組相比，YSH高、低劑量治療組和貝那普利組腎間質(zhì)TGF-β1、α-SMA表達(dá)水平顯著降低

9、（P<0.05）；YSH高劑量組與貝那普利組相比，差異無(wú)顯著性（P>0.05）。
　　 （4）BUN、UUN、SCR、UCR，及24小時(shí)尿蛋白定量結(jié)果：YSH高、低劑量治療組和貝那普利組與UUO組相比，BUN、UCR和UUN差異具有顯著性（P<0.01），YSH高劑量組與貝那普利組相比，差異無(wú)顯著性（P>0.05），SCR及24小時(shí)尿蛋白定量在各組間均無(wú)明顯差異（P>0.05）。
　　 結(jié)論：
　　 （1）YSH

10、抑制UUO模型大鼠腎間質(zhì)纖維化的作用與貝納普利相似，并具有一定的改善UUO模型大鼠腎功能的作用；
　　 （2）研究表明UUO模型大鼠腎間質(zhì)肥大細(xì)胞的浸潤(rùn)、功能狀態(tài)與腎間質(zhì)纖維化的嚴(yán)重程度有密切關(guān)系，而YSH可減少UUO模型大鼠腎間質(zhì)肥大細(xì)胞的數(shù)量，超微病理顯示具有抑制其脫顆粒的作用；
　　 （3）YSH抑制UUO術(shù)后腎組織中TGF-β1、α-SMA表達(dá)，提示YSH可能通過(guò)肥大細(xì)胞-TGF-β1-Smad途徑發(fā)揮抗腎間質(zhì)纖