1、目的: 研究消敏顆?？蛊つw、全身Ⅰ型超敏反應(yīng)的作用并探討其機制，為臨床應(yīng)用消敏顆粒治療蕁麻疹等Ⅰ型超敏反應(yīng)性疾病提供理論依據(jù)。 方法: 本實驗分三部分進行消敏顆?？耿裥统舴磻?yīng)的研究。首先，進行消敏顆粒抗皮膚Ⅰ型超敏反應(yīng)的研究，包括利用組胺、5-羥色胺所致小鼠毛細血管通透性增高實驗和小鼠耳異種被動皮膚超敏反應(yīng)(PCA)模型，研究消敏顆粒對組胺及5-羥色胺所致小鼠毛細血管通透性增高、PCA以及足跖腫脹的影響。其次，

2、進行消敏顆?？谷恝裥统舴磻?yīng)的研究，包括利用Compound48/80致小鼠休克及抗原所致豚鼠過敏性休克模型，研究消敏顆粒對動物過敏性休克的影響。最后，對消敏顆?？耿裥统舴磻?yīng)的機制進行探討，包括消敏顆粒對大鼠腹腔肥大細胞脫顆粒的影響；熒光測定改良法檢測消敏顆粒對大鼠肥大細胞釋放組胺的影響；免疫組化法檢測消敏顆粒對大鼠肥大細胞釋放5-羥色胺的影響；ELISA法檢測消敏顆粒對致敏大鼠血清IgE含量的影響；ELISA法檢測消敏顆粒對致敏大

3、鼠血清中細胞因子IFN-γ、IL-4的含量的影響；RT-PCR方法檢測消敏顆粒對致敏大鼠脾淋巴細胞的IFN-γmRNA、IL-4mRNA表達的影響；透射電鏡觀察消敏顆粒對脾組織T細胞、培養(yǎng)脾T細胞凋亡的影響；流式細胞術(shù)檢測消敏顆粒對血T細胞凋亡的影響。 結(jié)果:1.消敏顆粒對組胺致小鼠毛細血管通透性增高的影響：結(jié)果表明，消敏顆粒對組胺致小鼠毛細血管通透性增高有抑制作用，各劑量組與對照組比較均有顯著性差異(低劑量組P＜0.05，中、

4、高劑量組P＜0.01)，消敏顆粒低、中、高劑量組呈現(xiàn)明顯的量效關(guān)系。 2.消敏顆粒對5-羥色胺致小鼠毛細血管通透性增高的影響：結(jié)果表明，消敏顆粒對5-羥色胺致小鼠毛細血管通透性增高有抑制作用，各劑量組與對照組比較均有顯著性差異(P＜0.01)。 3.消敏顆粒對小鼠耳異種被動皮膚超敏反應(yīng)(PCA)的影響：結(jié)果表明，消敏顆粒各組PCA均明顯減輕，與對照組比較均有顯著性差異(P＜0.01)。 4.消敏顆粒對組胺所致小鼠

5、足跖腫脹的影響：結(jié)果表明，低劑量組在注射后30min時有一定抑制作用(P＜0.05)，以后隨著時間的延長，作用逐漸減弱。中劑量組和高劑量組在本實驗范圍內(nèi)的各時間段均可顯著抑制足跖腫脹。 5.消敏顆粒對Compound48/80致小鼠休克的影響：結(jié)果表明，可導致小鼠休克、死亡，消敏顆粒可以降低其死亡率，高劑量組效果較明顯，與模型組比較，有顯著性差異(P=0.05)。 6.消敏顆粒對抗原所致豚鼠過敏性休克的影響：結(jié)果表明，消

6、敏顆粒各組均可延緩其發(fā)敏時間，與模型組比較，均有顯著性差異(P＜0.01)。 7.消敏顆粒對大鼠血清IgE生成的影響：結(jié)果表明，消敏顆?？梢种艻gE的分泌，各劑量組與模型組比較均有顯著性差異(P＜0.01)。 8.消敏顆粒對大鼠腹腔肥大細胞脫顆粒的影響：結(jié)果表明，與正常組比較，各實驗組肥大細胞脫顆粒均增多，差異顯著。消敏顆粒各組與模型組比較，均可減少肥大細胞脫顆粒，差異有顯著意義(P＜0.01)。 9.消敏顆粒對

7、大鼠腹腔肥大細胞釋放組胺的影響：結(jié)果表明，消敏顆粒各組與模型組相比，大鼠腹腔肥大細胞組胺的釋放量均明顯降低(P＜0.01)，消敏顆粒高劑量組與撲爾敏組肥大細胞組胺的釋放量均低于低劑量組，差異有顯著意義(P＜0.01)。 10.消敏顆粒對大鼠腹腔肥大細胞釋放5-羥色胺的影響：結(jié)果表明，消敏顆粒各組部分腹腔肥大細胞顆粒脫失，5-羥色胺表達減弱。對細胞進行綜合積分可見，消敏顆粒各組均明顯高于模型組，差異有顯著性意義(P＜0.01)。

8、 11.消敏顆粒對大鼠血清IFN-γ、IL-4含量的影響：結(jié)果表明，消敏顆粒各組大鼠血清IFN-γ含量有增加的趨勢，其中以消敏顆粒高劑量組增加更明顯，與模型組比較，差異有顯著意義(P＜0.01)。消敏顆粒各組大鼠血清IL-4含量降低，其中以消敏顆粒高劑量組降低明顯，與模型組比較，差異有顯著意義(P＜0.01)。消敏顆粒組IFN-γ/IL-4高于模型組，差異有顯著意義(P＜0.01)。 12.消敏顆粒對大鼠脾IFN-γmRN

9、A、IL-4mRNA表達的影響：瓊脂糖電泳結(jié)果表明，消敏顆粒組和撲爾敏組IFN-γDNA經(jīng)擴增后可見光亮的條帶，消敏顆粒高劑量組和撲爾敏組強于其它組。模型組IL-4DNA擴增后其亮度強于正常組和各用藥組，正常組條帶最暗。相對表達量結(jié)果表明，消敏顆粒高劑量組大鼠脾組織IFN-γmRNA的表達增加明顯，與模型組比較差異有顯著意義(P＜0.01)。大鼠脾組織IL-4mRNA的表達模型組顯著高于正常組(P＜0.01)，消敏顆粒高劑量組表達顯著降

10、低(P＜0.01)。 13.透射電鏡觀察消敏顆粒對脾組織T細胞凋亡的影響結(jié)果：結(jié)果表明，消敏顆粒組可見到脾T淋巴細胞早期凋亡表現(xiàn)和典型的凋亡小體。 14.透射電鏡觀察消敏顆粒對脾T細胞凋亡的影響結(jié)果：結(jié)果表明，模型組的脾T淋巴細胞的結(jié)構(gòu)多趨于正常，發(fā)生明顯凋亡的細胞較少，偶見壞死脾T淋巴細胞。消敏顆粒組脾T淋巴細胞發(fā)生明顯的凋亡。 15.流式細胞儀檢測消敏顆粒對外周血T細胞凋亡的影響結(jié)果：結(jié)果表明，消敏顆粒組T淋

11、巴細胞凋亡量明顯增加。消敏顆粒組與模型組比較，T淋巴細胞凋亡百分率差異有顯著性(P＜0.01)。 結(jié)論: 1.消敏顆粒具有抑制皮膚Ⅰ型超敏反應(yīng)的作用：能抑制組胺及5-羥色胺致小鼠毛細血管通透性增高；能抑制小鼠異種皮膚被動過敏反應(yīng)；對組胺所致小鼠足跖腫脹具有抑制作用。 2.消敏顆粒具有抑制全身Ⅰ型超敏反應(yīng)的作用：能降低Compound48/80所致小鼠過敏性休克的死亡率；可以延緩抗原所致豚鼠發(fā)敏時間，高劑量組可降低

12、死亡率。 3.消敏顆粒具有減少肥大細胞脫顆粒；減少組胺和5-羥色胺的釋放；降低血清總IgE含量：增加大鼠血清IFN-γ含量，降低IL-4含量，促進IFN-γmRNA表達，抑制IL-4mRNA表達，使Th1/Th2比例上調(diào)；誘導T淋巴細胞凋亡等作用。 消敏顆粒不僅可以通過抑制IgE生成，減少肥大細胞等效應(yīng)細胞釋放生物活性介質(zhì)拮抗Ⅰ型超敏反應(yīng)，而且可能通過調(diào)節(jié)Th1/Th2亞群之間的免疫平衡、誘導T淋巴細胞凋亡等作用機制發(fā)揮