1、目的:本研究通過建立高脂血癥大鼠模型,以腸道Na+／膽汁酸轉(zhuǎn)運(yùn)體(ileal bile acid transpotter,IBAT)為研究對(duì)象,探討腸道Na+／膽汁酸轉(zhuǎn)運(yùn)體與膽汁酸代謝及高脂血癥形成的相關(guān)性,為防治高脂血癥提供新的依據(jù)和分子理論基礎(chǔ),有望為治療膽汁酸代謝紊亂及相關(guān)性疾病提供一種新的思路。
　　 方法:取Wistar雄性大鼠(體重145±8.5g)60只,隨機(jī)分為2組,每組30只:普通飲食對(duì)照組(簡(jiǎn)稱對(duì)照組)、高脂

2、飲食實(shí)驗(yàn)組(簡(jiǎn)稱實(shí)驗(yàn)組)。對(duì)照組予以普通飲食,實(shí)驗(yàn)組予以高脂飲食(配方為:在基礎(chǔ)飼料中加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.04膽固醇、0.1豬油、0.05蔗糖、0.005膽酸鈉、0.002丙基硫氧嘧啶),喂食90天,建立高脂血癥模型,定期取血用自動(dòng)生化儀檢測(cè)膽固醇含量,4—6周監(jiān)測(cè)血膽固醇水平,觀察建模是否達(dá)到要求。兩組入選大鼠均需排除已飲用含其它類藥物飲食,高脂血癥、糖尿病、畸形等疾病存在。建模成功后,所用實(shí)驗(yàn)方法分為以下兩個(gè)環(huán)節(jié):1.分別提取對(duì)照組和

3、實(shí)驗(yàn)組的空腸末端、回腸末端、盲腸及結(jié)腸近端組織的RNA,應(yīng)用逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(RT-polymerase chain reaction:RT—PCR)技術(shù)檢測(cè)兩組模型腸組織的IBAT基因表達(dá)的強(qiáng)度；2.取對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組的空腸末端、回腸末端、盲腸及結(jié)腸近端組織,石蠟切片后用免疫組化SP(streptavidin—perosidase)法檢測(cè)兩組模型腸組織的IBAT表達(dá)的強(qiáng)度。統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)運(yùn)用SPSS14.0 for windows統(tǒng)計(jì)軟件

4、包作統(tǒng)計(jì)學(xué)處理,P<0.05顯示有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)果:1.電泳結(jié)果顯示:實(shí)驗(yàn)中空腸末端、回腸末端、盲腸擴(kuò)增產(chǎn)物都出現(xiàn)了內(nèi)參β—actin基因的220bp擴(kuò)增帶和IBAT基因的355bp擴(kuò)增帶,且實(shí)驗(yàn)組IBAT基因擴(kuò)增帶亮度明顯強(qiáng)于對(duì)照組。結(jié)腸近端中未見IBAT基因擴(kuò)增帶。半定量結(jié)果分析:利用Quantity One軟件計(jì)算比較每一泳道中PCR產(chǎn)物條帶的光密度值,計(jì)算IBAT基因與β—actin條帶的光密度的相對(duì)比值,通過比

5、較各樣本IBAT基因的相對(duì)值,最終得出IBAT基因在空腸、回腸末端、盲腸組織中mRNA表達(dá)的相對(duì)含量。半定量結(jié)果的相對(duì)光密度值需每組每一實(shí)驗(yàn)對(duì)象同等處理?xiàng)l件下均重復(fù)測(cè)定3次,取其最終平均值作為統(tǒng)計(jì)用數(shù)據(jù)。最后結(jié)果顯示:結(jié)腸近端在實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組均無表達(dá),其余在對(duì)照組IBAT基因mRNA表達(dá)較低,空腸末端(0.88427±0.041664)、回腸末端(0.92013±0.049935)、盲腸(0.86777±0.0336157),實(shí)驗(yàn)組IB

6、AT基因mRNA表達(dá)較高,空腸末端(1.12817±0.050841)、回腸末端(1.14613±0.061868)、盲腸(1.14320±0.048016)表達(dá)差異性顯著,空腸近端(t=-25.6988.P<0.05)、回腸末端(t=-15.446 P<0.05)、盲腸(t=-24.007 P<0.05),均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 2.免疫組化SP(streptavidin—perosidase)法結(jié)果顯示:在高倍顯微鏡鏡下腸道

7、組織中出現(xiàn)黃色染色顆粒為陽性細(xì)胞。每張切片隨機(jī)選取5個(gè)視野,每個(gè)視野內(nèi)觀察100個(gè)細(xì)胞,陽性細(xì)胞≥10％為陽性,否則為陰性,利用四格表的Fisher確切概率法檢驗(yàn)。結(jié)果顯示:實(shí)驗(yàn)組空腸末端、回腸末端、盲腸表達(dá)陽性率分別為66.3％、78.5％、55.3％；對(duì)照組空腸末端、回腸末端、盲腸表達(dá)陽性率為10.3％、12.5％、8.95％。它們之間的差異有顯著性,空腸末端IBAT基因(X2=9.631 P<0.05),回腸末端IBAT基因(X2

8、=9.873 P<0.05),盲腸IBAT基因(X2=9.209 P<0.05)。
　　 結(jié)論:1.實(shí)驗(yàn)組大鼠的IBAT基因mRNA的表達(dá)較對(duì)照組明顯增加。2.實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組大鼠的結(jié)腸近端中未見IBAT基因的表達(dá)。3.實(shí)驗(yàn)組空腸末端,回腸末端及盲腸IBAT的表達(dá)明顯高于對(duì)照組,故在高脂血癥動(dòng)物回腸中膽汁酸的主動(dòng)轉(zhuǎn)運(yùn)及空腸中膽汁酸的被動(dòng)轉(zhuǎn)運(yùn)過程增強(qiáng),及盲腸參與膽汁酸轉(zhuǎn)運(yùn)增強(qiáng),進(jìn)而膽汁酸攝取率增加,增加體內(nèi)膽酸池大小和肝內(nèi)膽固醇含量