1、核酸適體(Aptamer)是經(jīng)“指數(shù)富集的配體系統(tǒng)進化”(systematic evolutionof ligands by exponential enrichment,SELEX)技術(shù)體外篩選得到的、由DNA或RNA組成的短的單鏈核苷酸序列。它與目標物結(jié)合具有高特異性和高親和力的特點,并且容易合成與修飾,穩(wěn)定性好,目標物種類廣泛,免疫原性低,越來越多地應(yīng)用于生物分析、化學(xué)生物學(xué)等領(lǐng)域。量子點具有優(yōu)越的光物理性能,如熒光量子產(chǎn)率高、光

2、穩(wěn)定性強、可以實現(xiàn)一元激發(fā)多元發(fā)射等等,在分子診斷、靶向治療、生物醫(yī)學(xué)成像與生物傳感等方面得到了廣泛應(yīng)用。本論文以非小細胞肺癌A549細胞為研究對象,以核酸適體為特異性識別基元,為了提高顆粒的細胞識別效率,發(fā)展簡單、通用的癌細胞檢測方法,完成了以下工作:
　　 1.基于核酸適體熒光探針定量測定細胞表面膜受體蛋白的分布密度
　　 利用能與細胞膜受體蛋白高特異性結(jié)合的核酸適體熒光探針,以A549細胞為識別對象,通過測定核酸適

3、體探針與A549細胞孵育前后熒光強度的變化,定量測定A549細胞表面核酸適體靶向的膜受體蛋白的分布密度。結(jié)果表明,平均每個A549細胞表面核酸適體的目標膜受體蛋白數(shù)目約為8.4×105個,分布密度約為1050個/μm2,該分布密度保證體積較大的量子點可以作為熒光標記物用于癌細胞識別,為量子點結(jié)合核酸適體用于A549細胞的識別提供了保障。
　　 2.基于量子點和核酸適體的非小細胞肺癌A549細胞的特異性識別
　　 用量子點

4、作為核酸適體的標記物,采用分步識別法(核酸適體先識別細胞,再用量子點進行熒光標記)實現(xiàn)了對A549細胞的特異性識別。考察了兩條核酸適體Slle、S6在不同溫度下對A549細胞的識別差異,并對量子點孵育時間、孵育濃度進行了優(yōu)化。結(jié)果表明,4℃和37℃,Slle、S6都能特異性識別A549細胞。量子點孵育時間為60 min時,熒光信號最強;量子點濃度為300nM時,陽性信號和背景間的差異最大。該工作說明了分步識別法可以實現(xiàn)A549細胞的高效

5、識別,為進一步的細胞檢測奠定基礎(chǔ)。
　　 3.基于量子點和核酸適體對A549細胞的定量檢測
　　 在第二部分工作基礎(chǔ)之上,比較了分步識別法與一步識別法(量子點、核酸適體先形成復(fù)合物,再進行細胞識別)的細胞成像效果。結(jié)果表明,基于量子點和核酸適體的分步識別法避免了空間位阻對核酸適體構(gòu)象的影響,相比于一步識別法,特異性更高,信背比約是一步識別法的3倍。在此基礎(chǔ)上,結(jié)合量子點熒光強度高、光穩(wěn)定性強、信背比高等優(yōu)勢,實現(xiàn)了非小細