1、目的:骨形態(tài)發(fā)生蛋白(bone morphogenetic protein,BMP)屬于轉(zhuǎn)化生長因子(Transformation growth factor,TGF)-β超家族成員,其生物學(xué)功能不僅限于其誘導(dǎo)成骨活性,還涉及幾乎全身所有系統(tǒng)的發(fā)育、生長及分化等.最近的研究發(fā)現(xiàn)在BMP家族中,BMP-6能夠在多種腫瘤中異常表達(dá),而且可能在腫瘤的發(fā)生和轉(zhuǎn)移中發(fā)揮了作用.因?yàn)榇萍に赝橄侔┑陌l(fā)生和轉(zhuǎn)移關(guān)系密切,該實(shí)驗(yàn)主要通過研究雌激素對乳腺

2、癌中BMP-6表達(dá)水平的影響,了解雌激素調(diào)控BMP-6方式,證實(shí)BMP-6在乳腺癌中的作用.方法:使用不同濃度的雌激素處理雌激素受體(ER)陽性的乳腺癌細(xì)胞MCF-7,72h后用半定量反轉(zhuǎn)錄PCR檢測BMP-6的表達(dá),并以雌激素受體陰性的乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231為對照.同時(shí)構(gòu)建了人BMP-6啟動(dòng)子的熒光素酶報(bào)告基因(BMP-6 Promotor Luciferase Report gene,BMP6 PLR)質(zhì)粒,并使用脂質(zhì)體瞬時(shí)

3、轉(zhuǎn)染該質(zhì)粒到MCF-7細(xì)胞中,通過檢測熒光素酶的表達(dá)水平,檢測雌激素對BMP-6啟動(dòng)子活性的影響.結(jié)果:ER陽性乳腺癌細(xì)胞MCF-7的BMP-6表達(dá)水平顯著高于ER陰性的乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231(P<0.01).MCF-7細(xì)胞中,10<'-5>、10<'-7>mol/L的雌激素能夠促進(jìn)BMP-6表達(dá)提高(P<0.05).在MDA-MB-231細(xì)胞中,雌激素?zé)o此作用.使用構(gòu)建的人BMP-6啟動(dòng)子的熒光素酶報(bào)告基因(BMP6 PLR)