1、背景：心肌纖維化系心肌成纖維細(xì)胞增殖、細(xì)胞外基質(zhì)合成及細(xì)胞凋亡等一系列復(fù)雜因素調(diào)控所產(chǎn)生的結(jié)果。在心肌纖維化的進(jìn)程中，轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β<,1>(TGF-β<,1>)起著重要調(diào)控作用，它通過(guò)加速心肌成纖維細(xì)胞的分化、抑制心肌成纖維的凋亡、促進(jìn)細(xì)胞外基質(zhì)的產(chǎn)生而刺激纖維化反應(yīng)。這些信號(hào)分子的作用受細(xì)胞的內(nèi)環(huán)境的影響，且具有器官特異性，細(xì)胞與細(xì)胞之間以及細(xì)胞與基質(zhì)間的相互作用也能促進(jìn)或阻止該信號(hào)通路。迄今為止，以TGF-β<,1>干預(yù)心肌成纖

2、維細(xì)胞的體外研究中，心肌成纖維細(xì)胞的生物學(xué)反應(yīng)程度及其作用機(jī)制尚不清楚。因此，以TGF-β<,1>干預(yù)心肌成纖維細(xì)胞，通過(guò)檢測(cè)其下游通路的信號(hào)分子，來(lái)探討其在心肌纖維化中的作用，對(duì)于改善心臟疾病的治療及降低疾病的纖維化所致的死亡具有重要意義。 目的：觀察TGF-β<,1>對(duì)原代培養(yǎng)的新生大鼠心肌成纖維細(xì)胞Ⅰ型與Ⅳ膠原表達(dá)的影響，探討TGF-β<,1>在心肌纖維化發(fā)生發(fā)展中的可能作用機(jī)制。 方法：取出生3.7天的SD大鼠心

3、臟，利用酶消化法結(jié)合差速貼壁體外培養(yǎng)心肌成纖維細(xì)胞；分別用不同濃度的TGF-β<,1>，(TGβ1=0ng/ml、1ng/ml、10ng/ml)干預(yù)心肌成纖維細(xì)胞，分別于干預(yù)后5h、24h，采用RT-PCR及免疫細(xì)胞化學(xué)染色法檢測(cè)Ⅰ型膠原和Ⅳ型膠原的表達(dá)。 結(jié)果： 1、用胰酶與Ⅱ型膠原酶合用消化分離新生大鼠心肌成纖維細(xì)胞，可將心肌細(xì)胞和心肌成纖維細(xì)胞分離，心肌成纖維細(xì)胞抗波形蛋白(vimentin)染色陽(yáng)性，抗α-橫紋肌

4、肌動(dòng)蛋白(α-sarcomeric actin)染色陰性。 2、用0ng/ml(對(duì)照組)，1ng/ml和10ng/ml的TGF-β<,1>干預(yù)心肌成纖維細(xì)胞5h，RT-PCR檢測(cè)Ⅰ型膠原/β-actin光密度值分別為0.61±0.02，0.73±0.03和0.86±0.04，光密度值隨著TGFβ1濃度的增加而增加，各組比較，差異有顯著性(P<0.01)；干預(yù)心肌成纖維細(xì)胞24h后，RT-PCR檢測(cè)Ⅰ型膠原/β-actin光密度值

5、分別為0.65±0.03，0.91±0.02和0.98±0.02，光密度值隨著TGF-β<,1>濃度的增加而增加，各組比較，差異有顯著性(p<0.01)。 3、用0ng/ml(對(duì)照組)，1ng/ml and 10ng/ml的TGF-β<,1>干預(yù)心肌成纖維細(xì)胞5h，RT-PCR檢測(cè)Ⅳ型膠原/β-actin光密度值分別為0.58±0.06，0.71±0.02，0.87±0.02，光密度值隨著TGF-β<,1>濃度的增加而增加，各組

6、比較，差異有顯著性(p<0.01)；干預(yù)心肌成纖維細(xì)胞24h后，RT-PCR檢測(cè)Ⅳ型膠原/β-actin光密度值分別為0.62±0.01，0.83±0.05，0.96±0.02，光密度值隨著TGF-β<,1>濃度的增加而增加，各組比較，差異有顯著性(p<0.01)。 4、用0ng/ml(對(duì)照組)，1ng/ml and 10ng/ml的TGF-β<,1>干預(yù)心肌成纖維細(xì)胞5h，24h后，用免疫細(xì)胞化學(xué)染色法檢測(cè)心肌成纖維細(xì)胞Ⅰ型膠