1、研究背景：
　　在現(xiàn)代輔助生殖技術(shù)（ART）中常用的促排卵方案是通過應(yīng)用大量的激素對(duì)卵巢進(jìn)行刺激而獲得成熟卵子進(jìn)而進(jìn)行體外受精-胚胎移植技術(shù)（IVF-ET），然而，大劑量的使用激素同時(shí)帶來了弊端，如促性腺激素反復(fù)刺激，提高卵巢過刺激綜合征（OHSS）的發(fā)生率，尤其是對(duì)于多囊卵巢綜合癥（PCOS）的患者來說，發(fā)生OHSS的幾率相對(duì)更高。同時(shí)，對(duì)卵巢的反復(fù)刺激可能會(huì)增加卵巢癌、子宮內(nèi)膜癌和乳腺癌的發(fā)病率。如果可以跳過使用大量激素進(jìn)行卵

2、巢刺激這一環(huán)節(jié)，直接利用不成熟卵子，那么將會(huì)使患者獲得更加安全和簡單的IVF治療。
　　卵母細(xì)胞體外成熟（in vitro maturation，IVM）技術(shù)為輔助生殖技術(shù)治療不孕癥提供了新的選擇。IVM是指從卵巢上的小卵泡中獲取未成熟卵母細(xì)胞，在體外經(jīng)過適宜的條件進(jìn)行成熟培養(yǎng)，使其發(fā)育成熟并獲得受精能力的過程。通常所說的 IVM技術(shù)是指卵母細(xì)胞體外成熟后再進(jìn)行體外受精-胚胎移植技術(shù)。其臨床意義主要在于：避免超促排卵帶來的卵巢過度

3、刺激的風(fēng)險(xiǎn)，這對(duì)于PCOS患者尤其重要；減少刺激周期間促性腺激素對(duì)其靶器官或組織（如子宮內(nèi)膜、卵巢和乳房等）產(chǎn)生的不良影響；節(jié)省醫(yī)藥花費(fèi)和治療時(shí)間；幫助解決卵巢組織冷凍保存后卵母細(xì)胞的成熟問題，以及未成熟卵母細(xì)胞冷凍后的應(yīng)用問題(Dal Canto，Mignini Renzini et al.2006)；用于為卵巢去勢患者保存生育力和建立
　　“卵母細(xì)胞庫”(Grynberg，El Hachem et al.2013)，未成熟卵母

4、細(xì)胞的獲取可以在月經(jīng)周期的任意階段進(jìn)行(Fadini，Mignini Renzini et al.2013)，可以防止促排卵過程拖延時(shí)間影響患者本身疾病的治療，更適用于激素敏感性腫瘤患者(Combelles and Chateau2012)；為有關(guān)卵母細(xì)胞成熟機(jī)制的研究建立體外模式。
　　卵母細(xì)胞發(fā)育至成熟是一個(gè)動(dòng)態(tài)的過程，卵細(xì)胞的成熟包括細(xì)胞核的成熟、細(xì)胞質(zhì)的成熟。其各細(xì)胞元件的形態(tài)和功能都會(huì)發(fā)生改變。卵母細(xì)胞體外成熟遇到的難題

5、之一就是細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)不能同步成熟的問題，由于IVM得到的卵母細(xì)胞核質(zhì)發(fā)育不同步，得到的已經(jīng)排出第一極體的卵母細(xì)胞在細(xì)胞質(zhì)方面還沒有做好受精的充分準(zhǔn)備。冷凍對(duì)處于發(fā)育不同階段的卵母細(xì)胞的影響也是有差異的。未成熟卵母細(xì)胞的染色體被包裹在核膜內(nèi)，而且尚未形成紡錘體結(jié)構(gòu)，這些都是相對(duì)于成熟卵母細(xì)胞來說，未成熟卵母細(xì)胞更能耐受冷凍保存的重要理論依據(jù)。但是復(fù)蘇后體外培養(yǎng)方案仍是需要解決的關(guān)鍵困難，研究提示未成熟卵母細(xì)胞冷凍后仍能排出第一極體（胞核

6、成熟），但是胞質(zhì)成熟能力可能（如紡錘體的形成）受損，從而影響以后的受精和進(jìn)一步發(fā)育能力(Li，F(xiàn)eng et al.2006)。
　　第一部分體外成熟培養(yǎng)及玻璃化冷凍對(duì)小鼠卵母細(xì)胞紡錘體及染色體分布的影響
　　研究目的：
　　本研究通過比較小鼠未成熟卵母細(xì)胞在不同成熟階段（GV/MI期或MII期）玻璃化冷凍后的紡錘體和染色體分布情況，推測最佳的冷凍卵母細(xì)胞階段，以及如何更好地利用未成熟卵母細(xì)胞。
　　材料與方法：

7、
　　將小鼠未成熟卵母細(xì)胞隨機(jī)分為三組：IVM組、冷凍未成熟卵母細(xì)胞組及冷凍成熟卵母細(xì)胞組，并以體內(nèi)成熟卵母細(xì)胞為對(duì)照組，對(duì)未成熟卵母細(xì)胞行體外成熟培養(yǎng)，對(duì)成熟卵母細(xì)胞進(jìn)行紡錘體和染色體免疫熒光染色，統(tǒng)計(jì)復(fù)蘇存活率、紡錘體及染色體正常形態(tài)率。
　　結(jié)果：
　　1.未成熟卵母細(xì)胞經(jīng)玻璃化冷凍的復(fù)蘇存活率與體外成熟卵母細(xì)胞（IVM-MII）（冷凍未成熟卵母細(xì)胞組 vs冷凍成熟卵母細(xì)胞組：77.4％ vs85.1%，P=0.

8、832）無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；
　　2.經(jīng)玻璃化冷凍復(fù)蘇的未成熟卵母細(xì)胞與新鮮未成熟卵母細(xì)胞相比，體外培養(yǎng)成熟率顯著下降（冷凍未成熟卵母細(xì)胞組vs冷凍成熟卵母細(xì)胞組：47.4%vs77.7%，P＜0.05）；
　　3.未成熟卵母細(xì)胞行冷凍復(fù)蘇后再體外培養(yǎng)成熟得到的 MII期卵母細(xì)胞正常紡錘體和染色體的比例明顯低于未成熟卵母細(xì)胞先培養(yǎng)成熟再冷凍復(fù)蘇存活的MII（冷凍成熟卵母細(xì)胞組vs冷凍未成熟卵母細(xì)胞組：20.6% vs9.7%，P＜

9、0.05），且兩者都顯著低于新鮮IVM-MII及體內(nèi)成熟的MII期卵母細(xì)胞（IVM組vs對(duì)照組：55.1%vs76.3%）（P＜0.05）。
　　結(jié)論：
　　1.玻璃化冷凍處理可降低未成熟卵母細(xì)胞的體外培養(yǎng)成熟率；
　　2.相較于體內(nèi)成熟的卵母細(xì)胞，經(jīng)體外成熟培養(yǎng)得到的MII期卵母細(xì)胞紡錘體和染色體的正常率明顯降低；
　　3.對(duì)未成熟卵母細(xì)胞先經(jīng)體外培養(yǎng)成為成熟卵母細(xì)胞再行玻璃化冷凍保存可提高其有效利用率。

10、>　　第二部分體外成熟培養(yǎng)對(duì)小鼠卵母細(xì)胞發(fā)育潛能的影響
　　研究目的：
　　觀察小鼠未成熟卵母細(xì)胞經(jīng)體外成熟培養(yǎng)（IVM）處理后其受精及胚胎發(fā)育情況，探討體外成熟培養(yǎng)對(duì)卵母細(xì)胞發(fā)育潛能的影響。
　　材料與方法：
　　取小鼠未成熟卵母細(xì)胞進(jìn)行體外成熟培養(yǎng)，得到成熟卵母細(xì)胞后用同種屬雄鼠精子進(jìn)行體外受精并培養(yǎng)至囊胚期，以體內(nèi)成熟的卵母細(xì)胞為對(duì)照。觀察對(duì)比兩組的受精率、卵裂率、囊胚形成率等，并進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析。

11、　　結(jié)果：
　　1.未成熟卵母細(xì)胞體外成熟培養(yǎng)的成熟率為77.0%。
　　2.未成熟卵母細(xì)胞經(jīng)體外成熟培養(yǎng)得到的成熟卵母細(xì)胞（IVM-MII）受精率明顯低于對(duì)照組（IVM-MII組vs對(duì)照組：39.5%vs76.3%，P＜0.05）。
　　3.未成熟卵母細(xì)胞經(jīng)體外成熟培養(yǎng)得到的成熟卵母細(xì)胞（IVM-MII）卵裂率明顯低于對(duì)照組（IVM-MII組vs對(duì)照組：37.8%vs89.3%，P＜0.05）。
　　4.未成熟