魚腥草注射液致大鼠和獼猴過敏性反應的比較研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、魚腥草注射液臨床中主要應用于熱淋熱痢、痰多咳嗽等疾病當中,而隨著過敏反應報道的增多,有許多學者對其致敏性進行了研究,但多方法單一,且所使用的實驗動物與人類差異較大,因此需要采用多種方法及更為合適的實驗動物對魚腥草注射液的致敏性進行再研究。
  本實驗中對魚腥草注射液對SD大鼠的致敏性反應進行評價。且通過本次實驗建立獼猴細胞因子SYBR GreenⅡ?qū)崟r熒光定量PCR檢測方法,并利用此方法對魚腥草所引起的過敏反應過程中相關(guān)細胞因子進

2、行檢測。對魚腥草注射液對獼猴的致敏性反應進行評價,并且綜合以上實驗對獼猴和大鼠兩種實驗動物在致敏性評價中的應用進行比較。
  本實驗中采用SD大鼠作為實驗動物,利用主動過敏實驗對魚腥草注射液所引起的過敏性反應進行評價,并采用ELISA法對此過程中的IgE、IgG及組胺進行檢測,利用熒光定量PCR法對IL-4、IL-10、IL-13和IFN-γmRNA表達水平進行檢測。設(shè)計引物,提取獼猴淋巴細胞中總RNA,逆轉(zhuǎn)錄成cDNA后建立以上

3、四種細胞因子實時熒光定量PCR檢測方法。以獼猴作為實驗動物,采用主動過敏試驗對魚腥草注射液所引起的過敏反應進行評價,并且采用ELISA法對此過程中過敏相關(guān)指標組胺、IgE及IgG進行檢測,以及利用熒光定量PCR法對過敏相關(guān)細胞因子IL-4、IL-10、IL-13和IFN-γmRNA表達水平進行檢測。
  結(jié)果發(fā)現(xiàn)SD大鼠主動過敏實驗中陽性對照組呈強陽性,陰性對照組呈陰性,魚腥草蒸餾液低劑量組及魚腥草蒸餾液高劑量組呈陰性,魚腥草注射

4、液A組及魚腥草注射液B組呈弱陽性。ELISA實驗結(jié)果顯示,魚腥草蒸餾液低劑量組及魚腥草蒸餾液高劑量組組胺及IgE均略有升高,但并不顯著(P>0.05),魚腥草注射液A組及魚腥草注射液B組中SD大鼠體內(nèi)IgE含量有所升高但并不顯著(P>0.05)。熒光定量PCR實驗中,魚腥草蒸餾液低劑量組及魚腥草蒸餾液高劑量組IL-4、IL-10、IL-13及IFN-γ均升高不顯著(P>0.05),而魚腥草注射液A組及魚腥草注射液B組中則顯著升高(P<0

5、.01,P<0.05)。本次實驗中所建立的獼猴相關(guān)細胞因子熒光定量PCR檢測方法靈敏度高,所有因子均可達102copies/μL,重復性好,β-actin Ct值批內(nèi)變異系數(shù)<0.02,批間變異系數(shù)介于0.018-0.060之間;IL-4Ct值批內(nèi)變異系數(shù)<0.04,批間變異系數(shù)介于0.032-0.042之間;IL-10 Ct值批內(nèi)變異系數(shù)<0.04,批間變異系數(shù)介于0.039-0.057之間;IL-13 Ct值批內(nèi)變異系數(shù)<0.02,

6、批間變異系數(shù)介于0.017-0.026之間;IFN-γCt值批內(nèi)變異系數(shù)<0.02,批間變異系數(shù)介于0.018-0.062之間。IL-4、IL-10、IL-13及IFN-γ熔解曲線顯示,產(chǎn)物為特異性單一峰。以獼猴作為實驗動物對魚腥草注射液致敏性評價實驗中,主動過敏試驗顯示,陽性對照組呈強陽性,陰性對照組呈陰性,魚腥草蒸餾液低劑量組及高劑量組均呈陰性,魚腥草注射液A組呈弱陽性,魚腥草注射液B組呈陽性。ELISA實驗結(jié)果顯示,魚腥草蒸餾液低

7、劑量組及高劑量組組胺及IgE均略有升高,但并不顯著(P>0.05),而對于魚腥草注射液A組及魚腥草注射液B組,組胺及IgE均顯著升高(P<0.01)。在熒光定量PCR實驗中,魚腥草蒸餾液低劑量組及高劑量組IFN-γ、IL-4、IL-10及IL-13均顯著升高(P<0.01)。魚腥草注射液A組及魚腥草注射液B組亦有所升高,但并不顯著(P>0.05)。
  本次實驗證明在全身主動過敏實驗中,獼猴對魚腥草注射液的過敏反應比SD大鼠更為激

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