1、 目的：(1)建立抑郁模型(小鼠絕望實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ秃托∈螳@得性無(wú)助實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?考察酒石酸艾芬地爾的抗抑郁作用；(2)建立液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜(LC-MS)法測(cè)定大鼠血漿中酒石酸艾芬地爾的濃度；(3)研究大鼠體內(nèi)酒石酸艾芬地爾的藥代動(dòng)力學(xué)特征,建立酒石酸艾芬地爾在大鼠體內(nèi)的藥-時(shí)曲線,為重復(fù)給藥提供依據(jù)。
方法：(1)建立小鼠絕望實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ秃托∈螳@得性無(wú)助實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?分為陰性對(duì)照組(生理鹽水)、實(shí)驗(yàn)組(酒石酸艾芬地爾)、陽(yáng)性實(shí)驗(yàn)組(氯胺

2、酮),并分別以累計(jì)不動(dòng)時(shí)間和逃避次數(shù)為指標(biāo),評(píng)價(jià)酒石酸艾芬地爾的快速起效抗抑郁作用。(2)建立 LC-MS 法測(cè)定大鼠血漿中酒石酸艾芬地爾的濃度。優(yōu)化色譜條件(色譜柱的選擇、流動(dòng)相的比例、進(jìn)樣量)和 MS條件(優(yōu)化 Fragmentor 電壓、最佳檢測(cè)離子等的選擇)；考察空白基質(zhì)是否對(duì)待測(cè)藥物測(cè)定存在干擾,并進(jìn)一步考察 LC-MS 方法的線性范圍、穩(wěn)定性、精密度、準(zhǔn)確度、提取回收率、基質(zhì)效應(yīng)等；(3)選取健康雄性 SD大鼠(250-30

3、0 g),給藥后在 15 個(gè)時(shí)間點(diǎn)(10、20、30、40、50、60 、75、90、100、110、120、150、180、240、360 min)取血漿測(cè)定血藥濃度,每個(gè)時(shí)間點(diǎn)5只,按 LC-MS 方法測(cè)定大鼠血漿中酒石酸艾芬地爾的濃度。(4)以采血時(shí)間為橫軸( X ),以平均血藥質(zhì)量濃度為縱軸( Y ),繪制酒石酸艾芬地爾藥-時(shí)曲線,所得數(shù)據(jù)應(yīng)用藥代動(dòng)力學(xué)專業(yè)軟件 DAS 2.0 ( Drugand Statisties soft

4、waro 2.0 )進(jìn)行運(yùn)算得到其藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)和房室模型。
結(jié)果：(1)小鼠強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)( FST )顯示,在給藥0.5 h、2.0 h和4.0 h后,陽(yáng)性對(duì)照組(氯胺酮)、低劑量組、中劑量組和高劑量組均顯著縮短小鼠累計(jì)不動(dòng)時(shí)間,且均與陰性對(duì)照組存在顯著性差異( P<0.05 ),而低劑量、中劑量、高劑量組三者之間縮短小鼠累計(jì)不動(dòng)時(shí)間差異并不明顯(P>0.05)；在給藥6.0 h后,陽(yáng)性對(duì)照組顯著縮短小鼠累計(jì)不動(dòng)時(shí)間,且

5、與陰性對(duì)照組存在顯著性差異(P< 0.05),但藥物組縮短小鼠累計(jì)不動(dòng)時(shí)間與陰性對(duì)照組不存在顯著性差異(P> 0.05)。(2)小鼠獲得性無(wú)助實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ徒Y(jié)果顯示：在給藥0.5 h、2.0 h和4.0 h后,陽(yáng)性對(duì)照組(氯胺酮)、高劑量組和低劑量均顯著減少小鼠對(duì)電擊的逃避失敗次數(shù),與陰性對(duì)照組存在顯著性差異( P<0.05),且低劑量和高劑量組之間減少逃避失敗次數(shù)差異并不明顯( P>0.05)。兩種抑郁模型的實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示：酒石酸艾芬地爾能快

6、速逆轉(zhuǎn)小鼠抑郁模型的行為,其可能具有與氯胺酮相似的快速起效抗抑郁作用。(3)建立了專屬性好、準(zhǔn)確度高、靈敏快捷的 LC-MS 法測(cè)定大鼠血漿中酒石酸艾芬地爾的濃度,其色譜條件為采用 C18 分析柱( Agilent,5 μm,4.6 ×15 mm)；預(yù)柱(Agilent,4 mm ×2.0),柱溫30℃；流動(dòng)相為甲醇-乙酸銨溶液( pH 7.20),流速：0.6 mL/min；進(jìn)樣量：10 μL,檢測(cè)波長(zhǎng) 274 nm。MS方法為：采用

7、電噴霧離子源單桿四級(jí)桿串聯(lián)質(zhì)譜,在正離子模式下進(jìn)行檢測(cè)?？瞻籽獫{中的內(nèi)源性物質(zhì)不干擾待測(cè)組分和內(nèi)標(biāo)的測(cè)定；基質(zhì)對(duì)酒石酸艾芬地爾也無(wú)明顯的離子抑制或增強(qiáng)現(xiàn)象,且在5.00~120.00 μg/L濃度范圍內(nèi),線性良好(r2=0.9957,n=6)；(4)采用藥代動(dòng)力學(xué)專業(yè)軟件DAS(Drugand Statisties softwaro 2.0)進(jìn)行數(shù)據(jù)處理、擬合得到的酒石酸艾芬地爾在大鼠體內(nèi)代謝的藥-時(shí)曲線,酒石酸艾芬地爾經(jīng)腹腔注射后在大

8、鼠體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)模型為單室模型,其達(dá)峰濃度為113.79 μg/L,半衰期為2.42 h。
結(jié)論：(1)對(duì)抑郁動(dòng)物模型行為學(xué)影響的試驗(yàn)證明,艾芬地爾在給藥后能迅速產(chǎn)生抗抑郁療效,效果在4h內(nèi)持續(xù)穩(wěn)定,但藥效不與劑量成正相關(guān)性；(2)建立了測(cè)定大鼠血漿中酒石酸艾芬地爾的濃度 LC-MC 方法,該方法準(zhǔn)確、快捷。(3)酒石酸艾芬地爾經(jīng)腹腔注射后在大鼠體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)模型為單室模型,其達(dá)峰濃度為113.79 μg/L,半衰期為2.42