1、目的:
　　近年來的研究發(fā)現(xiàn)，臍血作為一種尚未很好利用和開發(fā)的血源，其來源豐富，富含多種免疫細胞和干細胞，易于分離獲得。我們嘗試用小鼠基質(zhì)細胞誘導(dǎo)的方法建立具有較強細胞毒活性的人臍源單核細胞株。體外評估其抗腎細胞癌和膀胱尿路上皮細胞癌的效果。探討腎細胞癌、膀胱尿路上皮癌過繼性免疫治療的新方法。
　　方法:
　　臍血單核細胞來源于健康孕婦的臍血。淋巴細胞密度梯度離心法分離得到臍帶血單個核細胞。臍帶血單個核細胞（3×106

2、個）與一層預(yù)先在六孔板培養(yǎng)過夜的小鼠骨髓基質(zhì)細胞OP9共培養(yǎng)以誘導(dǎo)。1-2周后，轉(zhuǎn)移懸浮的細胞到新的基質(zhì)細胞層繼續(xù)培養(yǎng)一個月或更長時間以觀察到大量增殖的胚芽樣細胞出現(xiàn)，即為小鼠基質(zhì)細胞激活的單核細胞(mouse stromal cell activated cord blood monocyte，MSCACBM)。用人重組IL-2(human recombinant interlukin-2，rhIL-2)誘導(dǎo)獲得的臍血單核細胞，即淋巴

3、因子激活的臍血單核細胞(lymphokine activated cordblood monocyte，LACBM)和未進行誘導(dǎo)的臍帶血單核細胞(cord bloodmonocyte，CBM)作為對照。相差顯微鏡觀察細胞形態(tài)變化。流式細胞術(shù)檢測在這三種效應(yīng)細胞中CD4、CD8淋巴細胞亞群和CD57 NK細胞的數(shù)量和比例。MTT法檢測三種效應(yīng)細胞對腎細胞癌OS-RC-2細胞和膀胱尿路上皮癌T24細胞的細胞毒活性。
　　結(jié)果:

4、　　臍帶血單核細胞與小鼠骨髓基質(zhì)細胞OP9共培養(yǎng)1月余，可見大量的幼稚胚芽樣新生細胞。流式細胞術(shù)的結(jié)果顯示，在小鼠基質(zhì)細胞誘導(dǎo)的單核細胞中，CD4+為30.4±2.12％、CD8+為51.3±4.93％、CD57+為2.8±0.43％;而rhIL-2誘導(dǎo)的LACBM中CD4+、CD8+和CD57+分別為51.2±2.73％，19.2±1.27％和20.2±1.61％;而在CBM中則分別為52.8±5.10％、11.4±2.76％和10.

5、5±1.42％。統(tǒng)計學分析結(jié)果表明小鼠基質(zhì)細胞主要誘導(dǎo)CD8+淋巴細胞增殖;而rhIL-2主要誘導(dǎo)CD4+淋巴細胞和NK細胞增殖。MTT結(jié)果顯示，CBM對腎細胞癌和膀胱尿路上皮癌的細胞毒活性較差。rhIL-2和小鼠基質(zhì)細胞誘導(dǎo)后能增加單核細胞對腫瘤細胞的細胞毒作用。但與LACBM相比，小鼠基質(zhì)細胞誘導(dǎo)的人臍血單核細胞有更強的抗腫瘤能力。與尿路上皮癌細胞相比，小鼠基質(zhì)細胞誘導(dǎo)的單核細胞對腎細胞癌有更的細胞毒活性(P＜0.01)。