1、目的:根據(jù)分泌細(xì)胞因子和參與的免疫反應(yīng)的不同Th細(xì)胞被分為功能不同的Th1和Th2兩個(gè)效應(yīng)細(xì)胞亞群。Th1細(xì)胞分泌IL-2、IFN-γ、INF-β等細(xì)胞因子;Th2細(xì)胞則產(chǎn)生IL-4、IL-5、IL-6、IL-10、IL-13等細(xì)胞因子。Th1、Th2細(xì)胞參與不同的免疫應(yīng)答。TH1細(xì)胞通過(guò)分泌的細(xì)胞因子,具有抗病毒及其他細(xì)胞內(nèi)病原體、清除癌變細(xì)胞、介導(dǎo)遲發(fā)性超敏反應(yīng)和器官特異性自身免疫性疾病的作用。Th2細(xì)胞則通過(guò)產(chǎn)生的細(xì)胞因子介導(dǎo)體液

2、免疫應(yīng)答,與過(guò)敏性疾病,抗細(xì)胞外感染,移植物耐受,抑制自身免疫疾病等有關(guān)。在造血干細(xì)胞移植免疫中,TH1細(xì)胞被認(rèn)為和GVHD反應(yīng)相關(guān),而TH2細(xì)胞具有誘導(dǎo)免疫耐受,減少排異反應(yīng)的作用。對(duì)T淋巴細(xì)胞的分化調(diào)控機(jī)制進(jìn)行深入研究有助于闡明GVHD)免疫反應(yīng)發(fā)生機(jī)制具有重要意義。
　　 已知T-BET是T淋巴細(xì)胞向TH1分化的重要轉(zhuǎn)錄因子,調(diào)控IFN-γ的分泌;GATA3基因是T淋巴細(xì)胞向TH2分化的重要轉(zhuǎn)錄因子,調(diào)控IL-4的分泌。影

3、響Th細(xì)胞分化的PI3K/AKT(phosphatidylinositol_3'kinas/proteinkinase B)途徑、MAPK(有絲分裂原激活蛋白激酶)途徑亦是與張力蛋白同源的10號(hào)染色體缺失的磷酸酶基因(phosphatase and tensinhomolog deletedon chromosome ten,PTEN)作用的重要通路。為了研究PTEN基因介導(dǎo)的PI3K/AKT途徑對(duì)T淋巴細(xì)胞分化的作用,本研究以人T淋巴

4、細(xì)胞白血病細(xì)胞株iurkat細(xì)胞為研究對(duì)象,jurkat細(xì)胞具有分泌IFN-γ和IL-4的功能,因此可以作為研究T淋巴細(xì)胞的分化的靶細(xì)胞。通過(guò)轉(zhuǎn)染PTEN基因,了解轉(zhuǎn)染后過(guò)表達(dá)的PTEN基因?qū)urkat細(xì)胞T-bet,GATA-3表達(dá)的影響、以及jurkat細(xì)胞分泌IL-4和IFN-γ的變化,為進(jìn)一步揭示T淋巴細(xì)胞分化的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制打下基礎(chǔ)。
　　 方法:
　　 用攜帶有野生型PTEN基因及編碼綠色熒光蛋白基因的腺病毒

5、(Ad-PTEN-GFP)或空載體腺病毒(Ad-GFP),轉(zhuǎn)染iurkat細(xì)胞系,RT-PCR檢測(cè)轉(zhuǎn)染PTEN基因后對(duì)T-bet,GATA-3的表達(dá)的影響、以及細(xì)胞分泌IL-4和IFN-γ的變化。
　　 結(jié)果:
　　 1 用Ad-PTEN-GFP或Ad-GFP轉(zhuǎn)染jurkat細(xì)胞系,Ad-PTEN-GFP的jurkat胞內(nèi)PTEN(0.702±0.1)水平明顯高于未作任何處理的jurkat細(xì)胞組(0.307±0.03)和

6、AD.GFP轉(zhuǎn)染組(0.306±0.02),(P＜0.05);而未作任何處理的jurkat細(xì)胞組和AD-GFP組無(wú)顯著性差異(P＞0.05)。
　　 2 轉(zhuǎn)染48h后,轉(zhuǎn)染Ad-PTEN-GFP的iurkat細(xì)胞內(nèi)T-bet(0.603±0.1)水平明顯高于未作任何處理的jurkat細(xì)胞組(0.323±0.02)和AD-GFP轉(zhuǎn)染組(0.319±0.04),(P＜0.05);而未作任何處理的jurkat細(xì)胞組和AD-GFP轉(zhuǎn)染組

7、無(wú)顯著性差異(P＞0.05)。
　　 3 轉(zhuǎn)染48h后,轉(zhuǎn)染Ad-PTEN-GFP的jurkat細(xì)胞內(nèi)IFN-γ(0.613±0.01)明顯高于未作任何處理的jurkat細(xì)胞組(0.345±0.02)和AD-GFP轉(zhuǎn)染組(0.343±0.04),(P＜0.05);而未作任何處理的jurkat細(xì)胞組和AD-GFP轉(zhuǎn)染組無(wú)顯著性差異(P＞0.05)。
　　 4 轉(zhuǎn)染48h后,轉(zhuǎn)染Ad-PTEN-GFP的iurkat細(xì)胞內(nèi)GA

8、TA3水平(0.132±0.02)明顯低于未作任何處理的jurkat細(xì)胞組(0.396±0.05)和AD-GFP轉(zhuǎn)染組(0.389±0.06),(P＜0.05);而未作任何處理的jurkat細(xì)胞組和AD-GFP轉(zhuǎn)染組無(wú)顯著性差異(P＞0.05)。
　　 5 轉(zhuǎn)染48h后,轉(zhuǎn)染Ad-PTEN-GFP的jurkat細(xì)胞內(nèi)IL-4水平(0.289±0.01)明顯低于未作任何處理的jurkat細(xì)胞組(0.851±0.02)和AD-GFP

9、轉(zhuǎn)染組(0.848±0.01),(P＜0.05);而未作任何處理的jurkat細(xì)胞組和AD-GFP轉(zhuǎn)染組無(wú)顯著性差異(P＞0.05)。
　　 結(jié)論:本研究成功的應(yīng)用攜帶有野生型PTEN基因及編碼綠色熒光蛋白基因的腺病毒(Ad-PTEN-GFP),轉(zhuǎn)染jurkat細(xì)胞系,使PTEN基因的表達(dá)明顯增強(qiáng)。PTEN的高表達(dá)使T淋巴細(xì)胞的T-bet和IFN-γ的表達(dá)明顯增高;而GATA3和IL-4基因的表達(dá)水平降低,這些結(jié)果提示PTEN基