1、血腦屏障(blood-brain bartier,BBB)是在腦和脊髓的毛細血管與神經組織之間存在的一個動態(tài)的調節(jié)界面，能夠阻止絕大多數外源性物質透過，并選擇性的將腦內有害物質或過剩物質泵出腦外，維持腦內微環(huán)境的穩(wěn)定。但是，BBB對許多有價值的中樞神經系統(tǒng)(CNS)藥物的通透性也很低，嚴重影響了藥物的療效。因此，關于BBB的研究越來越多的受到人們的關注。 中藥中芳香類藥物“醒腦開竅”的作用主要是指開竅啟閉、宣發(fā)神氣，調神定志，使

2、心神復明，現代醫(yī)學認為是增加BBB的通透性，促進其他CNS藥物進入腦組織，發(fā)揮療效。石菖蒲是傳統(tǒng)的芳香開竅藥之一，民間單用或與其他中藥配伍使用廣泛，主要用于腦病的治療，有確切的療效，提示石菖蒲對BBB有一定作用。本文主要研究石菖蒲醒腦開竅、透過血腦屏障的有效成分及其作用機制，為中藥“芳香走竄、引藥上行”提供理論基礎和實驗依據。 按照《中國藥典》2005版一部附錄揮發(fā)油提取法甲法，提取揮發(fā)油，提取率約為1.58％，去油水煎液濃縮至

3、1g/ml. 采用氣相色譜-質譜(GC/MS)聯(lián)用儀檢測揮發(fā)油樣品中含有α-細辛醚、β-細辛醚、愈創(chuàng)木烯、菖蒲烯酮，相同條件下檢測服用揮發(fā)油后大鼠的腦脊液，結果顯示α-細辛醚，β-細辛醚可透過BBB進入腦脊液。 采用液相色譜-質譜(HPLC/MS)聯(lián)用儀測定去油水煎液樣品及灌服去油水煎液的大鼠腦脊液樣品，檢測到三個化合物，分子量分別為396，452，339，已知石菖蒲化合物中尚未包括。 透射電鏡下觀察給藥前后大鼠

4、大腦皮層BBB的超微結構，可發(fā)現石菖蒲各提取部分均可使BBB內皮細胞之間的緊密連接(tight junction，TJ)疏松，但BBB基本完整，尚未破壞。 以冰片為陽性藥，初步探討石菖蒲各提取部分對伊文思蘭(EB)透過BBB的促進作用，即以EB在腦內的含量反映BBB的通透性，統(tǒng)計分析表明冰片在灌胃2.5h后腦內EB含量顯著高于空白組(P<0.01)，石菖蒲在11.7g/kg劑量下自給藥0.5h至2.5h未見明顯作用；延長石菖蒲給

5、藥時間，石菖蒲揮發(fā)油劑量為23.4g/kg和11.7g/kg時，5h后腦內EB含量顯著高于空白組(P<0.05)，且有劑量依賴性趨勢；總藥劑量為11.7g/kg時，5h后腦內EB含量顯著高于空白組(P<0.01)。石菖蒲各提取部分給予小鼠灌胃一周后，腹腔注射苯妥英鈉，采用HPLC方法檢測苯妥英鈉在腦內的濃度，結果顯示：石菖蒲總組動物腦內苯妥英鈉的含量較高于未給石菖蒲組動物腦內的苯妥英鈉含量，4h后仍保持較高濃度(P<0.01)。

6、 利用HPLC-ECD檢測腦組織內5-羥色胺(5-HT)的濃度，統(tǒng)計分析得：與空白組比較，揮發(fā)油組小鼠大腦中5-HT的含量增加(P<0.05)，石菖蒲水煎液組及總藥組中5-HT的含量顯著增加(P<0.01)。 應用Hela細胞系作為評價石菖蒲對BBB上P-糖蛋白活性的載體，0.5h時石菖蒲各部分(揮發(fā)油、水煎液、總藥)可明顯增強長春新堿(VCR)的細胞毒性(P<0.01)；8h后揮發(fā)油部分仍可明顯增強VCR的細胞毒性(P<0.0

7、1)，揮發(fā)油的藥效維持時間明顯長于陽性藥維拉帕米(VER)(P<0.01)：24h后，陽性藥及石菖蒲各部分對VCR的細胞毒性無明顯影響(P>0.05)。 完成上述工作的基礎上，采用兩次酶消化、梯度離心的方法分離得到純度較高的腦微血管內皮細胞，原代培養(yǎng)大鼠腦微血管內皮細胞，嘗試建立血腦屏障體外模型。 綜上，石菖蒲能夠影響大鼠BBB的超微結構，增強BBB對EB的通透性，促進CNS藥苯妥英鈉進入腦內的含量增加，具有開啟BBB、