1、瀘州醫(yī)學院碩士學位論文靶向性RNA干擾載體的構建及其對MCF7細胞hTERT基因表達和細胞凋亡影響的研究姓名：喬鑫申請學位級別：碩士專業(yè)：腫瘤分子遺傳學指導教師：稅青林20090501量。MCF7細胞和造血干細胞分別設置實驗組、陰性對照組、CMV對照組、空白對照組。其中，實驗組為攜帶DF3啟動子的hTERT干●擾質粒pGenesil10mir30DF3hTERT；陰性對照組為攜帶DF3啟動子而無hTERT干擾序列的質粒pGenesil1

2、0mir30DF3腿；CMV對照組為攜帶CMV啟動子的hTERT干擾質粒pGenesil10mir30CMVhTERT；空白對照組僅含等量PBS液。以構建的質粒分別轉染乳腺癌MCF7細胞各組和造血干細胞各組，于轉染后24h、36h、48h和72hMTT法檢測乳腺癌MCF7細胞和造血干細胞生長情況以及增殖抑制率；于轉染后48hELISA法檢測兩類細胞組中hTERT蛋白濃度的變化；并通過流式細胞儀檢測各組細胞的凋亡情況。結果：①重組質粒pG

3、enesil10mir30DF3hTERT經(jīng)酶切鑒定以及測序鑒定證實目的序列已準確插入到預計位點，DF3啟動子已成功替換原質粒中CMV啟動子，符合設計要求，構建成功。②采集臍血50ml，臺盼藍拒染率100％，臍血采集2小時內(nèi)分離，得細胞懸液10ml，細胞計數(shù)10x109，臺盼藍拒染率99％。轉染前經(jīng)流式細胞儀檢測造血干細胞含量為886％。@MTT試驗結果顯示：乳腺癌MCF7細胞的實驗組和CMV對照組細胞生長速度減慢、增殖顯著抑制；造血干