1、本文就維持性血液透析患者血清體外誘導血管新生及內(nèi)皮細胞凋亡進行了研究，主要從以下幾部分展開： 第一部分：維持性血透患者血清體外誘導血管新生 目的：探討維持性血液透析患者血清在體外誘導血管新生及其機制。方法：用維持性血透患者血清(實驗組)及健康人血清(對照組)分別培養(yǎng)人臍靜脈內(nèi)皮細胞，倒置顯微鏡下觀察血管樣結構形成，MTT法檢測細胞增殖，Transwell小室測定細胞遷移能力，比色法檢測細胞內(nèi)活性氧產(chǎn)生，細胞免疫化學和We

2、stern-blot法檢測內(nèi)皮細胞p38蛋白表達。結果：實驗組內(nèi)皮細胞培養(yǎng)30h后有血管樣結構形成，細胞增殖能力和細胞遷移能力均高于對照組，差異有顯著性(P＜0.05)；與對照組比較，培養(yǎng)10h內(nèi)皮細胞p-p38表達及培養(yǎng)30h細胞內(nèi)活性氧產(chǎn)生均增加，差異有顯著性(P＜0.05)，且分別與細胞增生和細胞遷移具有相關性(P＜0.05)。結論：維持性血透患者血清能夠在體外誘導血管新生，其機制可能與內(nèi)皮細胞內(nèi)p-p38表達增加及ROS產(chǎn)生增多

3、有關。 第二部分：維持性血液透析患者血清體外誘導新生血管的內(nèi)皮細胞凋亡 目的：進一步探討維持性血液透析患者血清在體外誘導血管新生同時，也促進了新生血管的內(nèi)皮細胞凋亡及其機制。方法：用維持性血透患者血清(實驗組)及健康人血清(對照組)分別培養(yǎng)人臍靜脈內(nèi)皮細胞，倒置顯微鏡下觀察血管樣結構形成，MTT法檢測細胞增殖，用Transwell細胞小室測定細胞遷移能力，TUNEL法檢測細胞凋亡，比色法檢測細胞內(nèi)活性氧產(chǎn)生，細胞免疫化學

4、和Western-blot法檢測細胞內(nèi)p38和caspase-3表達。結果：內(nèi)皮細胞在血清培養(yǎng)基培養(yǎng)30h后，實驗組有血管樣結構形成，TUNEL法染色顯示，血清刺激40h后形成血管樣結構區(qū)域的內(nèi)皮細胞出現(xiàn)凋亡，與對照組比較差異有顯著性(P＜0.05)；實驗組內(nèi)皮細胞內(nèi)p-p38、caspase-3表達增多，而細胞內(nèi)ROS產(chǎn)生持續(xù)增加，與對照組比較差異有顯著性(P＜0.05)，并且ROS與內(nèi)皮細胞凋亡具有正相關性(P＜0.05)。結論：血

5、液透析患者血清既可誘導血管新生，又可促進其所形成血管的內(nèi)皮細胞凋亡，其機制可能與內(nèi)皮細胞內(nèi)p-p38、caspase-3表達增加以及ROS產(chǎn)生增多有關。 第三部分：短期維持性血透患者與長期維持性血透患者血清體外誘導血管新生及內(nèi)皮細胞調亡的比較 目的：比較短期血液透析患者血清與長期血液透析患者血清對體外誘導的血管新生以及內(nèi)皮細胞凋亡的影響。方法：用長期透析患者血清(長期透析組)和短期透析患者血清(短期透析組)分別培養(yǎng)人臍靜

6、脈血管內(nèi)皮細胞，倒置顯微鏡下觀察血管樣結構形成，MTT法檢測細胞增殖，用Transwell小室測定細胞遷移能力，TUNEL法檢測細胞凋亡，比色法檢測細胞內(nèi)活性氧產(chǎn)生，細胞免疫化學和Western-blot法檢測內(nèi)皮細胞p38和caspase-3表達。結果：長期透析組內(nèi)皮細胞培養(yǎng)30h后，有血管樣結構形成，培養(yǎng)40h出現(xiàn)新生血管的內(nèi)皮細胞凋亡，而短期透析組內(nèi)皮細胞無明顯血管新生及細胞凋亡；長期透析組內(nèi)皮細胞遷移及增殖能力強于短期透析組，差

7、異有顯著性(P＜0.05)；長期透析組內(nèi)皮細胞活性氧產(chǎn)生與細胞內(nèi)p-p38、caspase-3表達強于短期透析組(P＜0.05)；并且內(nèi)皮細胞產(chǎn)生的ROS與細胞的凋亡與遷移以及內(nèi)皮細胞表達的p-p38與內(nèi)皮細胞增生具有相關性(P＜0.05)。結論：與短期透析患者血清比較，長期維持性血液透析患者血清在體外誘導臍靜脈內(nèi)皮細胞血管樣結構形成能力更強，其所形成血管的內(nèi)皮細胞也易凋亡，其機制可能與長期血透患者血清培養(yǎng)的內(nèi)皮細胞的活性氧產(chǎn)生增多及細