1、背景：間充質干細胞(mesenchymal stem cells，MSCs)是骨髓中不同于造血干細胞的具有多向分化的干細胞，近年來研究表明MSCs不僅在支持造血、器官移植中發(fā)揮作用，還發(fā)現(xiàn)MSCs對T/B淋巴細胞有顯著的免疫負調節(jié)作用，但其免疫抑制的機制目前并不清楚。 研究目的：探討B(tài)ALB/c小鼠MSCs或MSCs聯(lián)合雷帕霉素(Rapa)對鼠脾淋巴細細胞的免疫調節(jié)作用，以及人MSCs對系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)患者外周血T淋巴細

2、胞的免疫調節(jié)作用，為MSCs的臨床應用打下基礎。 實驗方法：(1)小鼠實驗部分：常規(guī)分離培養(yǎng)BALB/c鼠的MSCs，實驗前用直線加速器(15GY)預處理。分離BALB/c鼠脾淋巴細胞，分別用刀豆蛋白A(ConA)、脂多糖(LPS)作為脾T淋巴細胞和B淋巴細胞的刺激劑。分組：脾細胞組(陽性對照組)，脾細胞+MSCs1組(脾細胞：MSCs =1：0.01)，脾細胞+MSCs2組(脾細胞：MSCs=1：0.02)，脾細胞+MSCs3

3、 組(脾細胞：MSCs=1：0.2)。脾細胞+MSCs(脾細胞：MSCs=1：0，02)+雷帕霉素(Rapa.，終濃度為80ng/ml)組，脾細胞+Rapa組。采用MTT法檢測脾淋巴細胞增殖的吸光值(D值)，流式細胞術(FCM)檢測T、B淋巴細胞CD69、CD28和CD86的表達和T淋巴細胞凋亡情況，實時定量RT-PCR (Real-time RT-PCR)測定T淋巴細胞IFN-γ、IL-10mRNA的表達水平。(2)SLE患者實驗部分

4、：分離培養(yǎng)健康人MSCs，并用直線加速器(15GY)進行預處理。分離健康人和SLE患者外周血T淋巴細胞，在植物血凝素(PHA)刺激下，將人MSCs與T淋巴細胞作用。分組：T淋巴細胞組(陽性對照組)，T淋巴細胞+MSCs1組(脾細胞：MSCs=1：0.01)，T淋巴細胞+MSCs2組(T淋巴細胞：MSCs=1：0.02)，T淋巴細胞+MSCs3組(T淋巴細胞：MSCs=1：0.2)。采用MTT法檢測T淋巴細胞增殖， FCM檢測T淋巴細胞C

5、D152、CD28的表達，Real-time PCR測定IFN-γ和IL-6 mRNA的表達水平。實驗結果：(1)MSCs-能明顯抑制ConA和LPS刺激的小鼠脾淋巴細胞的增殖(P＜0.01)，抑制T淋巴細胞凋亡(P＜0.01)，促進T淋巴細胞IFN-γ mRNA表達、抑制IL-10 mRNA表達(P＜0.01)。隨MSCs數(shù)量增加，作用更加明顯。 (2)Rapa有協(xié)同MSCs抑制脾淋巴細胞的增殖、協(xié)同抑制T淋巴細胞凋亡、協(xié)同促進IFN

6、-γ mRNA表達和協(xié)同抑制IL-10 mRNA表達(P＜0.05)。MSCs或MSCs聯(lián)合Rapa對T、B淋巴細胞CD69、CD28和 CD86的表達均無明顯影響(P＞0.05)。(3)人MSCs可明顯抑制健康人和SLE患者的T淋巴細胞增殖(P＜0.01)，其抑制作用與MSCs的數(shù)量成正相關。MSCs對健康人和SLE患者的CD3+CD152+細胞以及健康人CD3+CD28+細胞無顯著影響，MSCs對SLE患者T淋巴細胞的CD28表達有