1、第一部分8％乳化異氟醚兔硬膜外麻醉作用的觀察研究 目的：觀察8％乳化異氟醚用于兔硬膜外腔的作用，以明確該藥是否具有硬膜外麻醉作用。 方法：(1)藥理學(xué)觀察：硬膜外腔成功置管的成年雄性新西蘭大白兔40只，隨機(jī)分為乳化異氟醚組、利多卡因組、脂肪乳組和生理鹽水組，每組10只，分別接受硬膜外腔注射8％乳化異氟醚1ml、1％利多卡因1ml、30％脂肪乳溶液1ml和生理鹽水1ml。觀察和監(jiān)測用藥前及用藥后1、3、5、10、15、20

2、、25、30分鐘和之后每隔10分鐘一次的皮膚感覺、軀體運(yùn)動(dòng)、意識(shí)以及耳動(dòng)脈MAP等的變化，直至各項(xiàng)觀察指標(biāo)完全恢復(fù)正常后1小時(shí)為止。實(shí)驗(yàn)后兩周持續(xù)觀察動(dòng)物硬膜外麻醉后相關(guān)并發(fā)癥的發(fā)生情況。(2)組織病理學(xué)觀察：硬膜外成功置管的成年雄性大鼠12只，隨機(jī)分為乳化異氟醚組和生理鹽水組，每組6只，分別接受硬膜外腔注射8％乳化異氟醚1ml和生理鹽水1ml。分別于給藥后20分鐘和給藥后6小時(shí)分兩批處死動(dòng)物，去脊髓、神經(jīng)根和神經(jīng)節(jié)組織做常規(guī)病理切片，

3、HE染色后光鏡下觀察。 結(jié)果：(1)藥理學(xué)觀察結(jié)果：給藥后乳化異氟醚組和利多卡因組的MAP均有一過性下降，而脂肪乳組和生理鹽水組未見MAP明顯下降；實(shí)驗(yàn)中所有動(dòng)物的感覺和運(yùn)動(dòng)功能均完全恢復(fù)正常，實(shí)驗(yàn)后兩周內(nèi)亦未見相關(guān)并發(fā)癥發(fā)生。(2)組織學(xué)觀察結(jié)果：兩組動(dòng)物的脊髓、神經(jīng)根及神經(jīng)節(jié)的形態(tài)結(jié)構(gòu)均表現(xiàn)正常，未發(fā)現(xiàn)明顯病理性改變。 結(jié)論：8％乳化異氟醚硬膜外腔給藥可產(chǎn)生明確的、可逆性的硬膜外麻醉作用，并且不影響動(dòng)物的意識(shí)狀態(tài)，組

4、織學(xué)上也是安全的。 第二部分大鼠尾部局部靜脈麻醉動(dòng)物模型的建立與驗(yàn)證 目的：建立大鼠尾部局部靜脈麻醉動(dòng)物模型，為相關(guān)研究提供方法。 方法：選擇健康成年雄性SD大鼠進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。先用24號(hào)靜脈留置針在鼠尾中末段穿刺靜脈并留置套管，然后用彈力驅(qū)血帶從尾尖部向上驅(qū)血至尾中、上三分之一交界處，在此處綁扎彈力止血帶后拆除驅(qū)血帶即可注藥觀察。注藥后拔去套管針，用UGO BASILE 7360型熱輻射甩尾儀分別測試止血帶下方和上方

5、鼠尾部分的甩尾反應(yīng)時(shí)間以反映鎮(zhèn)痛作用，用52mm鱷魚夾測試相應(yīng)部位的夾尾反應(yīng)以反映麻醉作用。 結(jié)果： 1、止血帶對(duì)大鼠TFL和夾尾反應(yīng)影響的觀察結(jié)果：隨止血帶時(shí)間的延長，止血帶組動(dòng)物的止血帶下方TFL逐漸升高，前20分鐘內(nèi)TFL與基礎(chǔ)值和假止血帶組比較P>0.05，但30以后各時(shí)點(diǎn)的TFL與基礎(chǔ)狀態(tài)以及假止血帶組比較均有顯著的升高。觀察期間假止血帶組的TFL沒有明顯的改變。兩組動(dòng)物的止血帶上方TFL在觀察期間均未見明顯改

6、變，組間及組內(nèi)比較均無顯著性差異。觀察期間兩組動(dòng)物各夾尾部位的夾尾反應(yīng)均未見明顯改變，均表現(xiàn)為陽性。 2、環(huán)境溫度變化對(duì)大鼠尾痛閾影響的觀察結(jié)果：開始浸浴后，15℃組止血帶下方TFL上升迅速，各時(shí)點(diǎn)與基礎(chǔ)值及其它兩組相比均有顯著性差異；25℃組和37℃組各時(shí)點(diǎn)的TFL組間比較無差異，但與基礎(chǔ)值相比，30分鐘時(shí)的TTL明顯升高，各時(shí)點(diǎn)止血帶上方TFL組間和組內(nèi)比較均無顯著性差異，觀察期間各組動(dòng)物各夾尾部位的夾尾反應(yīng)均未見改變。

7、 3、最佳用藥容量確定結(jié)果：動(dòng)物的平均體重為229±17g；達(dá)到尾中、末三分之一交界處和止血帶下方1cm處夾尾反應(yīng)消失的用藥容量分別為0.25±0.05ml和0.34±0.05ml。 4、藥理學(xué)觀察結(jié)果：給藥后利多卡因組和布比卡因組的鎮(zhèn)痛作用起效時(shí)間均為1±0min；麻醉作用起效時(shí)間利多卡因組為1±0min、布比卡因組為1.4±0.8min；松開止血帶后鎮(zhèn)痛恢復(fù)時(shí)間利多卡因組為26±17min，，布比卡因組為56±22min

8、，組間比較差異具有顯著性；麻醉恢復(fù)時(shí)間利多卡因組為16±12min、布比卡因組為31±19min，后者明顯長于前者；各組止血帶上方TFL和夾尾反應(yīng)給藥前后無明顯改變；生理鹽水組的未觀察到任何麻醉和鎮(zhèn)痛作用。 結(jié)論：該局部靜脈麻醉模型操作簡單、成功率高、結(jié)果可靠等優(yōu)點(diǎn)，可用于相關(guān)研究。但使用時(shí)應(yīng)該注意止血帶時(shí)間和環(huán)境溫度等因素對(duì)測定結(jié)果的影響。 第三部分8％乳化異氟醚大鼠尾部局部靜脈麻醉作用的觀察 目的：利用大鼠尾

9、部局部靜脈麻醉模型觀察8％乳化異氟醚是否具有局部靜脈麻醉作用，為進(jìn)一步探討揮發(fā)性麻醉藥的局部作用及其機(jī)制提供依據(jù)。 方法：健康成年雄性大鼠40只，隨機(jī)分為4組：乳化異氟醚組、利多卡因組、脂肪乳組、及生理鹽水組，每組10只。先對(duì)大鼠尾部依次進(jìn)行尾靜脈穿刺置管、驅(qū)血、上止血帶，然后按分組情況分別注入8％乳化異氟醚0.5ml、0.5％利多卡因0.5ml、30％脂肪乳注射液0.5ml和生理鹽水0.5ml。給藥完畢后拔除靜脈套管針，開始觀

10、察測試。用UGO BASILE 7360型熱輻射甩尾儀測定大鼠用藥前后的甩尾反應(yīng)、用鱷魚夾測試夾尾反應(yīng)。觀測記錄注藥后1、3、5、10、15、20分鐘和之后每隔10分鐘一次的甩尾反應(yīng)時(shí)間、夾尾反應(yīng)和意識(shí)變化等情況，直至TFL恢復(fù)正常后60分鐘，但整個(gè)觀察期不能少于120分鐘。 結(jié)果：給藥后脂肪乳組及生理鹽水組未觀察到任何麻醉和鎮(zhèn)痛作用。實(shí)驗(yàn)過程中各組動(dòng)物的意識(shí)狀態(tài)均未見明顯改變、止血帶上方甩尾反應(yīng)和夾尾反應(yīng)亦未見改變。實(shí)驗(yàn)后所有

11、動(dòng)物的尾部感覺和運(yùn)動(dòng)功能均完全恢復(fù)正常，兩天的觀察未見局部皮膚顏色的改變、未有潰瘍和壞死情況出現(xiàn)。 結(jié)論：8％乳化異氟醚可產(chǎn)生局部靜脈鎮(zhèn)痛和麻醉作用，其麻醉作用有效率為80％。 第四部分大鼠尾神經(jīng)阻滯麻醉動(dòng)物模型的建立與驗(yàn)證 目的：建立清醒大鼠尾神經(jīng)阻滯麻醉的動(dòng)物模型，為相關(guān)研究提供方法。 方法：(1)尾神經(jīng)阻滯操作：將大鼠置于大鼠固定器內(nèi)，尾部外露，在鼠尾根部及其下方4cm處分別扎上彈力止血帶以防注射時(shí)

12、藥液向兩端擴(kuò)散。以26號(hào)注射針頭連接1ml注射器在兩止血帶之間進(jìn)行尾神經(jīng)阻滯，緊貼尾側(cè)靜脈溝上緣向尾根方向進(jìn)針，針體與尾長軸呈45度夾角并指向尾中心軸，進(jìn)針3-5mm左右即可抵達(dá)尾椎棘突側(cè)面骨質(zhì)，回抽無血后即可注藥0.1ml。注藥完畢后拔出穿刺針，將穿刺點(diǎn)上移或下移1cm，以同樣的方法再行穿刺。一側(cè)穿刺完成后再以同樣的方法穿刺對(duì)側(cè)。穿刺注藥完成后2min松開兩端的止血帶，開始觀測。(2)麻醉有效率和恢復(fù)率觀察：成年SD大鼠60只，隨機(jī)分

13、為利多卡因組和生理鹽水組，每組30只，分別接受2％利多卡因和生理鹽水尾神經(jīng)局部注射給藥。注藥后15分鐘用甩尾儀測定TFL、用鱷魚夾做夾尾試驗(yàn)，記錄TFL延長達(dá)到和未達(dá)到100％的動(dòng)物數(shù)以及夾尾反應(yīng)陽性和陰性的動(dòng)物數(shù)；6小時(shí)和24小時(shí)后再次重復(fù)甩尾和夾尾測試，觀察TFL夾尾反應(yīng)恢復(fù)情況。根據(jù)觀察結(jié)果計(jì)算麻醉有效率和恢復(fù)率。(3)成年SD大鼠30只，隨機(jī)分為利多卡因組、布比卡因組和NS組，每組10只，分別接受2％利多卡因、0.75布比卡因以

14、及生理鹽水尾神經(jīng)局部注射給藥。觀察動(dòng)物給藥完成后5分鐘、10分鐘和之后每隔10分鐘一次的TFL、夾尾反應(yīng)以及抬腳時(shí)間的變化，測得的TFL和抬腳時(shí)間數(shù)據(jù)均換算為相應(yīng)的“最大效應(yīng)百分比”，用以反映鎮(zhèn)痛效果。 結(jié)果：(1)麻醉有效率和恢復(fù)率觀察結(jié)果：無論以甩尾試驗(yàn)還是夾尾試驗(yàn)結(jié)果為準(zhǔn)，利多卡因組麻醉有效率均為100％、給藥后6小時(shí)的恢復(fù)率均為100％，而生理鹽水組的所有動(dòng)物均未觀察到麻醉阻滯作用。(2)利多卡因與布比卡因大鼠尾神經(jīng)阻滯

15、的觀察結(jié)果：給藥后利多卡因組和布比卡因組的TFL均于10分鐘內(nèi)達(dá)到最大值，同時(shí)夾尾均反應(yīng)消失；布比卡因組的鎮(zhèn)痛和麻醉作用持續(xù)時(shí)間明顯長于利多卡因組，而鎮(zhèn)痛和麻醉作用的起效時(shí)間兩組間比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；生理鹽水組未觀察到任何麻醉阻滯作用；三組動(dòng)物給藥前后抬腳時(shí)間無明顯變化。 結(jié)論：大鼠尾神經(jīng)阻滯模型具有操作簡單、成功率高、結(jié)果可靠等優(yōu)點(diǎn)，可以用于相關(guān)研究。 第五部分8％乳化異氟醚大鼠尾神經(jīng)阻滯麻醉作用的觀察 目的：觀

16、察8％乳化異氟醚是否具有外周神經(jīng)阻滯麻醉作用。 方法：健康成年雄性SD大鼠40只，隨機(jī)分為乳化異氟醚組、利多卡因組、脂肪乳組和生理鹽水組，每組10只，分別接受8％乳化異氟醚0.4ml、1％利多卡因0.4ml、30％脂肪乳0.4ml和生理鹽水0.4ml尾神經(jīng)局部注射。觀察注藥后5、10、15、20分鐘以及之后每10分鐘一次的TFL、夾尾反應(yīng)、抬腳時(shí)間以及動(dòng)物的意識(shí)狀態(tài)等，直至TFL恢復(fù)正常60分鐘為止，但整個(gè)觀察過程不能少于240

17、分鐘。實(shí)驗(yàn)后觀察兩天內(nèi)鼠尾局部皮膚的改變情況，包括皮膚顏色改變、潰瘍和壞死等局部并發(fā)癥。 結(jié)果：尾神經(jīng)局部給藥后乳化異氟醚組有7只大鼠出現(xiàn)了局部麻醉作用，而利多卡因組10只大鼠全部出現(xiàn)了局部麻醉作用。乳化異氟醚組和利多卡因組的鎮(zhèn)痛作用起效時(shí)間均為5±0min、麻醉作用起效時(shí)間分別為6.4±2.4min和5±0min、鎮(zhèn)痛作用持續(xù)時(shí)間分別為113±22min和76±13min、麻醉作用持續(xù)時(shí)間分別為86±13min和43±13mi