1、急性壞死性胰腺炎(acute necrotizing pancreatitis，ANP)是當(dāng)前外科急腹癥中最為兇險的疾病之一，病情演變復(fù)雜，并發(fā)癥多，病死率高。近年發(fā)現(xiàn)早期的多器官功能衰竭(multiple organ failure，MOF)和后期的感染，是造成急性壞死性胰腺炎患者死亡的主要原因?，F(xiàn)已發(fā)現(xiàn)其中腸道細(xì)菌移位(bacterial translocation，BT)是胰腺感染的主要原因。所以，維護(hù)腸黏膜屏障功能(gut ba

2、rrier function，GBF)的完整性和防止腸道細(xì)菌移位成為治療ANP的一個重要環(huán)節(jié)。本實(shí)驗(yàn)中我們利用大鼠建立．ANP模型，應(yīng)用雷公藤多甙(an extract of tripterygium wilfordiihook F，TⅡ)聯(lián)合生長抑素(somatostatin，S)治療ANP大鼠，探討中西醫(yī)結(jié)合治療對大鼠急性壞死性胰腺炎腸道細(xì)菌移位的影響。 第一部分：大鼠急性壞死性胰腺炎模型的建立 目的：探索一種理想的

3、ANP動物模型的制備，便于以后的實(shí)驗(yàn)研究。 方法：選擇SD大鼠，采用改良的膽胰管逆行注射法制備大鼠ANP模型。逆行胰膽管穿刺注射3.5％?；悄懰徕c0.2ml/100g(壓力3.4～3.9kPa,速度0.25ml/min)，誘導(dǎo)制備大鼠ANP模型并分為兩組，分別為假手術(shù)組(SO)和壞死組(ANP)。各組均隨機(jī)標(biāo)記6只觀察術(shù)后生存時間；術(shù)后24小時，觀察血清淀粉酶、血清脂肪酶活性；觀察胰腺病理學(xué)變化。 結(jié)果：ANP組大鼠術(shù)后

4、3天的存活率降低，ANP組血清淀粉酶和脂肪酶活性較SO組明顯升高(p<0.01)，ANP組大鼠注射后5min可見胰腺水腫，15min見胰腺出血，20-30min出現(xiàn)胰腺廣泛出血、壞死表現(xiàn)。病理學(xué)評分與SO組相比有顯著升高。 結(jié)論：本實(shí)驗(yàn)在我院外科實(shí)驗(yàn)室以往建立的制備ANP模型方法的基礎(chǔ)上，采用改良的細(xì)針穿刺逆行胰管注射法，保持一定的注液濃度、壓力和速度，加上絲線結(jié)扎胰管入十二指腸腸端，可以減少胰管刺破或造模液返流致十二指腸損害的

5、發(fā)生，提高了成功率。所制作的大鼠模型能誘發(fā)ANP，并能維持較長的生存時間，便于以后的實(shí)驗(yàn)觀察療效。 第二部分：急性壞死性胰腺炎大鼠腸道黏膜屏障功能的損害及腸道細(xì)菌移位 目的：深入探討急性壞死性胰腺炎時腸道黏膜屏障的變化和腸道細(xì)菌移位的情況。 方法：SD大鼠隨機(jī)分為兩組：假手術(shù)組(SO)和壞死組(ANP)。術(shù)后24小時，觀察大鼠ANP模型的回腸黏膜通透性、回腸絨毛高度和黏膜厚度的變化，測定血漿D-乳酸濃度和血漿內(nèi)毒

6、素水平，并行臟器細(xì)菌培養(yǎng)。 結(jié)果：ANP組血漿內(nèi)毒素水平較SO組升高(p<0.01)，細(xì)菌培養(yǎng)SO組均無陽性，ANP組細(xì)菌培養(yǎng)總陽性率為43.1％，其中以腹水細(xì)菌培養(yǎng)陽性率最高，為75％，菌種鑒定主要為腸球菌和變形桿菌。ANP組24小時后血漿D-乳酸濃度高于SO組，有顯著差異(p<0.01)。ANP組24小時回腸黏膜病理形態(tài)學(xué)發(fā)生變化，大鼠回腸黏膜間質(zhì)層明顯充血、水腫、淋巴管擴(kuò)張、絨毛增粗，并見單核細(xì)胞及中性粒細(xì)胞浸潤，柱狀上皮

7、細(xì)胞壞死、脫落，部分絨毛脫落、缺損。 從絨毛高度和黏膜厚度測量值上觀察發(fā)現(xiàn)ANP組明顯減小，腸壁明顯變薄?？疾霢NP組乳酸濃度和絨毛高度和黏膜厚度的關(guān)系，進(jìn)行相關(guān)回歸分析，兩者呈顯著負(fù)相關(guān)(p<0.01)，乳酸濃度逾高者其絨毛高度和黏膜厚度值越小。 結(jié)論：腸道黏膜屏障完整性的評價主要是形態(tài)學(xué)和功能學(xué)兩個方面。本組大鼠壞死性胰腺炎時的回腸黏膜病理形態(tài)學(xué)的變化提示AMP大鼠腸道的機(jī)械屏障明顯受損；同時血漿D-乳酸濃度顯著上升

8、，與腸黏膜改變有顯著的相關(guān)性，證明血漿D-乳酸濃度從功能上可反映ANP大鼠腸道屏障功能有顯著損害，腸道屏障受損為細(xì)菌移位提供了條件。本組實(shí)驗(yàn)中，大鼠壞死性胰腺炎的內(nèi)毒素水平和臟器細(xì)菌培養(yǎng)陽性率明顯升高，證明內(nèi)毒素血癥和腸道的細(xì)菌移位是由于早期的腸道通透性升高和腸道屏障受損所致。 第三部分：雷公藤多甙聯(lián)合生長抑素治療對大鼠急性壞死性胰腺炎腸道細(xì)菌移位的影響 目的：應(yīng)用雷公藤多甙聯(lián)合生長抑素治療ANP大鼠，探討中西醫(yī)結(jié)合治療

9、對大鼠壞死性胰腺炎腸道細(xì)菌移位的影響。 方法：逆行胰膽管穿刺注射3.5％?；悄懰徕c(0.2ml/100g)誘導(dǎo)ANP模型。分為五個組，分別為假手術(shù)組(SO)、壞死組(ANP)、生長抑素治療組(ANP+S)、雷公藤多甙治療組(ANP+T)和雷公藤多甙+生長抑素治療組(ANP+T+S)。各組均隨機(jī)標(biāo)記6只以觀察術(shù)后生存時間；術(shù)后24小時，測定血漿D-乳酸濃度；觀察血清淀粉酶、血清脂肪酶活性和血漿內(nèi)毒素水平；作臟器細(xì)菌培養(yǎng)；觀察胰腺和

10、回腸黏膜結(jié)果：雷公藤多甙與生長抑素聯(lián)合治療ANP大鼠，顯著降低血漿D-乳酸濃度，降低血清淀粉酶、血清脂肪酶活性；減輕胰腺組織炎癥細(xì)胞浸潤、水腫；使腸黏膜病理變化減輕，絨毛高度和黏膜厚度增加；降低血漿內(nèi)毒素水平和臟器細(xì)菌培養(yǎng)陽性率。 結(jié)論：雷公藤多甙聯(lián)合生長抑素的治療可以改善ANP大鼠胰腺和腸道的損傷，加強(qiáng)腸道的生物學(xué)屏障，對腸黏膜屏障損害有一定的治療作用。由于降低了腸源性細(xì)菌及內(nèi)毒素移位的發(fā)生率，聯(lián)合治療可有效阻止ANP的進(jìn)展，

11、其療效顯著優(yōu)于單獨(dú)使用生長抑素或雷公藤多甙，提示中西醫(yī)結(jié)合治療ANP有廣闊前景，值得進(jìn)一步深入探討。 總結(jié) 采用我院外科實(shí)驗(yàn)室以往建立的制備ANP模型方法成功制作大鼠ANP模型，適用于ANP的實(shí)驗(yàn)研究和觀察療效。ANP大鼠存在腸黏膜屏障功能的損害和腸道細(xì)菌移位。雷公藤多甙聯(lián)合生長抑素的治療可以改善ANP大鼠胰腺和腸道的損傷，加強(qiáng)腸道的生物學(xué)屏障，對腸黏膜屏障損害有一定的治療作用。由于降低了腸源性細(xì)菌及內(nèi)毒素移位的發(fā)生率，