1、 本研究通過對(duì)高糖作用一定時(shí)間的β細(xì)胞的胰島素基因表達(dá)及分泌功能的檢測(cè)來觀察β細(xì)胞功能障礙的表現(xiàn)模式。并進(jìn)一步對(duì)功能受損的β細(xì)胞進(jìn)行分子生物學(xué)檢測(cè)，通過觀察長(zhǎng)期高糖作用對(duì)KI-3K及IDX-1活性及表達(dá)的影響來揭示高糖導(dǎo)致β細(xì)胞功能損傷的分子機(jī)制。 方法:首先進(jìn)行Wistar大鼠體外胰島分離及培養(yǎng)和β細(xì)胞功能損傷模型的建立.然后利用免疫沉淀、及Western技術(shù)檢測(cè)細(xì)胞第4周末時(shí)PI3K的p85亞單位的蛋白含量以及與IRS-1

2、/IRS-2的結(jié)合的p85的蛋白含量、磷酸化的PKB的蛋白含量(N=4)。半定量RT-PCR檢測(cè)培養(yǎng)至第3、4周的三組細(xì)胞的IDX-1的mRNA表達(dá)量(N=4)。以及Westen免疫印跡分析檢測(cè)第4周末三組的IDX-1的蛋白表達(dá)量。并用間接免疫熒光和免疫組化染色顯示IDX-1在不同狀態(tài)下下細(xì)胞內(nèi)的原位表達(dá)(N=6)。 研究表明:體外高濃度葡萄糖長(zhǎng)期培養(yǎng)可使β細(xì)胞的功能受損，表現(xiàn)為胰島素刺激后胰島素的合成及分泌能力均下降。長(zhǎng)期高濃度