1、[背景] 急性冠脈綜合征(ACS)是冠心病患者發(fā)生心臟事件的主要表現(xiàn)，其共同的病理生理基礎(chǔ)是冠狀動(dòng)脈粥樣斑塊在多種因素作用下斑塊變得不穩(wěn)定并發(fā)生破裂，繼發(fā)血栓形成。但造成斑塊不穩(wěn)定的原因和斑塊破裂的機(jī)制目前尚不明確，研究表明斑塊內(nèi)金屬基質(zhì)蛋白酶(MMPs)表達(dá)增強(qiáng)可能與此有關(guān)。巨噬細(xì)胞是參與動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的主要炎性細(xì)胞，而且MMPs主要在巨噬細(xì)胞合成。研究顯示MMP-9是造成斑塊不穩(wěn)定的主要基質(zhì)蛋白酶，是反應(yīng)斑塊穩(wěn)定性的主要因素之一

2、。近來臨床研究顯示血管緊張素Ⅱ受體阻斷劑(ARB)能夠降低心血管事件發(fā)生率和患者死亡率，并且與藥物本身的降壓作用無關(guān)，提示ARB可能具有獨(dú)立于降壓作用之外的穩(wěn)定斑塊的作用。但ARB類藥物坎地沙坦是否通過減少斑塊內(nèi)巨噬細(xì)胞聚集、降低MMP-9的表達(dá)從而穩(wěn)定斑塊并具有預(yù)防斑塊破裂的作用，以及替米沙坦對(duì)單核/巨噬細(xì)胞AT1、AT2受體、MMP-9表達(dá)的作用如何，目前相關(guān)的實(shí)驗(yàn)研究較少。 [目的] 1.本研究在建立兔不穩(wěn)定粥樣斑

3、塊模型的基礎(chǔ)上，使用坎地沙坦進(jìn)行干預(yù)，應(yīng)用藥物誘發(fā)不穩(wěn)定斑塊破裂，觀察其預(yù)防斑塊破裂的作用，并探討其機(jī)制； 2.觀察替米沙坦對(duì)THP-1單核/巨噬細(xì)胞AT1、AT2受體、MMP-9表達(dá)的影響及聯(lián)合應(yīng)用阿托伐他汀對(duì)MMP-9表達(dá)的作用，初步探討PKC抑制劑Staurosporine在MMP-9表達(dá)中的作用。 [方法] 1.應(yīng)用34只新西蘭雄性大白兔，隨機(jī)分為3組：①正常對(duì)照組(n=10簡稱正常組)；②高脂加損傷組(

4、n=12簡稱模型組)；③坎地沙坦干預(yù)組(n=12簡稱干預(yù)組)。正常組給予普通飼料喂養(yǎng)，其余兩組在高脂喂養(yǎng)的基礎(chǔ)上應(yīng)用球囊損傷腹主動(dòng)脈，于實(shí)驗(yàn)12周末對(duì)模型組和干預(yù)組行藥物誘發(fā)斑塊破裂，觀察坎地沙坦預(yù)防斑塊破裂的作用。 2．應(yīng)用免疫組化染色，比較各組主動(dòng)脈斑塊內(nèi)MMP-9陽性面積、巨噬細(xì)胞含量及膠原面積比。 3．Western blot法測(cè)定主動(dòng)脈斑塊內(nèi)MMP-9蛋白表達(dá)水平。 4．應(yīng)用流式細(xì)胞學(xué)、免疫熒光、激光共

5、聚焦方法檢測(cè)THP-1細(xì)胞AT1、AT2受體的表達(dá)。 5．應(yīng)用ELISA法檢測(cè)THP-1巨噬細(xì)胞上清液MMP-9的表達(dá)。 【結(jié)果】 1．體重和血脂：經(jīng)過12周的喂養(yǎng)后，各實(shí)驗(yàn)組體重均較自身基礎(chǔ)水平顯著升高。模型組和干預(yù)組血脂較自身基礎(chǔ)水平顯著升高。模型組和干預(yù)組比較，TC、LDL-C無顯著性變化(P>0.05)但干預(yù)組TG較模型組顯著降低(P<0.05)。 2．病理形態(tài)學(xué)觀察：正常組主動(dòng)脈內(nèi)膜光滑，未見到

6、脂紋和斑塊。模型組動(dòng)脈粥樣 硬化嚴(yán)重，粥樣斑塊范圍廣泛，程度重，9個(gè)主動(dòng)脈血管標(biāo)本中有7個(gè)標(biāo)本共12處發(fā)生斑塊破裂及血栓形成，斑塊內(nèi)含有大量的巨噬／泡沫細(xì)胞，膠原含量少，纖維帽很薄或不明顯，呈現(xiàn)不穩(wěn)定斑塊的特點(diǎn)。斑塊破裂伴血栓形成、侵蝕斑塊和鈣化斑塊均有存在。干預(yù)組動(dòng)脈粥樣硬化較模型組輕，整個(gè)主動(dòng)脈管壁層次尚清晰，粥樣斑塊的纖維帽較厚，斑塊內(nèi)含有較少的巨噬／泡沫細(xì)胞，平滑肌細(xì)胞和膠原含量相對(duì)較多，呈穩(wěn)定斑塊的特點(diǎn)。干預(yù)組經(jīng)藥物誘發(fā)后的

7、10個(gè)標(biāo)本中有2個(gè)標(biāo)本3處發(fā)生斑塊破裂，斑塊破裂數(shù)量與模型組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)。 3．免疫組化和Western blot結(jié)果：干預(yù)組斑塊內(nèi)MMP-9陽性面積比較模型組顯著降 低；干預(yù)組斑塊內(nèi)巨噬細(xì)胞陽性面積比較模型組顯著降低；干預(yù)組斑塊內(nèi)膠原陽 性面積比較模型組顯著增加。干預(yù)組MMP-9蛋白表達(dá)水平較模型組明顯降低。 4．流式細(xì)胞學(xué)、免疫熒光及激光共聚焦檢測(cè)替米沙坦顯著降低THP-1細(xì)胞AT1受體 的

8、表達(dá)，而對(duì)AT2受體無明顯影響。 5．替米沙坦顯著降低Ang Ⅱ誘導(dǎo)的THP-1巨噬細(xì)胞MMP-9表達(dá)并呈濃度依賴性， 替米沙坦聯(lián)合阿托伐他汀可進(jìn)一步降低THP-1巨噬細(xì)胞MMP-9的表達(dá)。 6．AT2受體阻斷劑PD123319對(duì)THP-1巨噬細(xì)胞MMP-9的表達(dá)無明顯影響。 7．PKC抑制劑Staurosporine顯著減低THP-1巨噬細(xì)胞MMP-9的表達(dá)。 [結(jié)論] 1.本研究顯示，在動(dòng)物