1、植入前遺傳學(xué)診斷(preimplantationgeneticdiagnosis，PGD)是在胚胎著床之前即對(duì)其遺傳物質(zhì)進(jìn)行分析，診斷胚胎是否有某些遺傳物質(zhì)異常，確定該胚胎是否適合移植的診斷方法。因此防止遺傳病的發(fā)生，并避免選擇性流產(chǎn)和多次流產(chǎn)可能造成身心的傷害以及倫理道德觀念的沖突。目前已用于基因或染色體異常高風(fēng)險(xiǎn)夫婦的遺傳學(xué)篩查。 PGD基本過程包括控制性超排卵，獲得卵母細(xì)胞，常規(guī)IVF／ICSI受精，體外培養(yǎng)至6-10細(xì)胞

2、期，活檢胚胎取1．2個(gè)卵裂球或者胚胎發(fā)育到囊胚期取部分細(xì)胞，根據(jù)指征選擇PCR或FISH方法進(jìn)行相應(yīng)的檢測(cè)，再將2-3個(gè)經(jīng)分析正常的胚胎移植入子宮。廣義講，PGD還包括受精前配子的檢測(cè)，如X、Y精子的分離，極體的基因或染色體檢測(cè)。 PGD技術(shù)的難度限制了其廣泛的應(yīng)用。其難點(diǎn)主要表現(xiàn)在以下三方面。1卵裂球活檢；2單個(gè)卵裂球的固定；3單細(xì)胞分析技術(shù)：目前在PGD中常用的技術(shù)有單細(xì)胞聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(polymerasechainrea

3、ction，PCR)和熒光原位雜交(nuorescenceinsimhybridization，F(xiàn)ISH)兩種基本方法。單細(xì)胞PCR存在三個(gè)特異的缺點(diǎn)：PCR擴(kuò)增效率、污染及等位基因脫扣(Alleledrop-out，ADO)，而FISH不僅可以進(jìn)行胚胎植入前性別診斷，更在研究胚胎嵌合現(xiàn)象、染色體數(shù)目及結(jié)構(gòu)異常方面具有PCR所沒有的優(yōu)勢(shì)。因此FISH是PGD中一種重要檢測(cè)方法。 目前關(guān)于單個(gè)卵裂球固定共有4種不同的固定方法：KC

4、l法；Tween．20／HCl法；甲醇／冰醋酸法；Tween-20／HCl+甲醇／冰醋酸法。另外，PGD中關(guān)于FISH方法探針和固定的卵裂球細(xì)胞核的變性方法有兩種：分開變性法和共變性法。四種固定方法和兩種變性方法在各個(gè)生殖中心分別有使用，但其系統(tǒng)比較國(guó)內(nèi)外尚未見報(bào)道。 本研究分為兩部分。第一部分比較常用的四種單個(gè)卵裂球的固定方法和兩種探針變性方法，旨在找到合適卵裂球固定方法及適合的FISH方法，并探討該方法進(jìn)行PGD的可行性。第

5、二部分胚胎植入前遺傳學(xué)診斷的臨床應(yīng)用。材料和方法 結(jié)論: 1、激光透明帶打孔方法輔助下采用吸拉法進(jìn)行胚胎活檢是可行、有效的。 2、對(duì)不同的卵裂球固定方法進(jìn)行比較，Tween-20／HCl+甲醇／冰醋酸法有較高的固定率和出信號(hào)率而均明顯優(yōu)于其它3種傳統(tǒng)單細(xì)胞固定方法。 3、比較了分開變性和共變性雜交方法的出信號(hào)率，其差異無顯著性。建立了適合本中心的熒光原位雜交方法并且成功的應(yīng)用于臨床PGD。 4、對(duì)