1、 目的：本研究主要是從細胞凋亡的角度探討四君子湯加味大黃對燙傷Wistar大鼠腸道屏障的保護作用及其作用機理。方法：1.實驗分組：實驗用Wistar大白鼠(瀘州醫(yī)學院動物實驗中心提供)于實驗前一周購入,體重(250±25)g,雌雄不限,健康；分籠飼養(yǎng),室溫在26℃、濕度55%的環(huán)境,自由攝食、飲水。隨機分為燙傷中藥治療組(n=25),燙傷對照組(n=25)和正常對照組(n=5)。分別設傷后12h、1天、3天、5天、7天5個時相,每個時

2、相設有5只大鼠。2.中藥制備：采用四君子湯加味大黃制備湯劑,生藥共重80g,其中黨參25g,茯苓20g,白術20g,甘草5g,大黃10g,加水300ml,文火煎制30分鐘,過濾濃縮至1.0g/ml,中藥制劑冰箱4℃保存,給藥前復溫。3.模型制作：參照文獻[1]方法致大鼠背部30%TBSAⅢ度燙傷,所有燙傷組及治療組大鼠均采用相同的處置方式,傷后立即給予腹腔注射乳酸林格氏液抗休克,創(chuàng)面涂磺胺嘧啶銀乳膏。治療組傷后6h開始在清醒狀態(tài)下經口腔

3、置入灌胃針,緩慢注入所制備的加味四君子湯,每天2次,2ml/次,燙傷對照組和正常對照組以相同的方法灌注等量生理鹽水。4.標本采集及處理：于傷后各個時相,分別提取距大鼠回盲部2cm處小腸段約3cm及腸系膜淋巴結(MLNs)標本,4%多聚甲醛固定,脫水后常規(guī)石蠟包埋并切片,后進行HE染色及原位末端轉移酶標記技術(TUNEL) 檢測細胞凋亡。5.指標檢測及方法：①光鏡下觀察各組小腸粘膜及其上皮細胞在HE染色、TUNEL染色情況下組織病理學變化

4、并進行對比；②光鏡下觀察各組腸系膜淋巴結及其淋巴細胞在HE染色、TUNEL染色情況下組織病理學變化并進行對比；③計算燙傷后各組小腸粘膜上皮細胞不同時相的凋亡率,并進行統(tǒng)計學分析；④計算燙傷后各組腸系膜淋巴結淋巴細胞不同時相的凋亡率,并進行統(tǒng)計學分析。結果：1.燙傷組大鼠小腸粘膜及其上皮細胞、腸系膜淋巴結及其淋巴細胞形態(tài)結構損傷嚴重,治療組較燙傷組損傷程度輕；2.燙傷組及治療組的腸粘膜上皮細胞及腸系膜淋巴結淋巴細胞各時相的凋亡率較對照組升