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![枯草芽孢桿菌脂肽類(lèi)物質(zhì)的分離純化鑒定與應(yīng)用研究.pdf_第1頁(yè)](https://static.zsdocx.com/FlexPaper/FileRoot/2019-3/1/8/a5f4e2c1-d171-4ec1-be56-1535e68d688f/a5f4e2c1-d171-4ec1-be56-1535e68d688f1.gif)
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1、枯草芽孢桿菌屬于芽孢桿菌中的一屬,在農(nóng)業(yè)、環(huán)境治理、醫(yī)學(xué)、食品和洗滌化學(xué)業(yè)中有著廣泛的應(yīng)用。
本研究從枯草芽孢桿菌菌株(B.subtilis)培養(yǎng)液中通過(guò)鹽酸沉淀法,后用甲醇萃取,正己烷洗脫得到了一類(lèi)脂肽類(lèi)物質(zhì),平板測(cè)定顯示脂肽提取物對(duì)棉花黃萎病致病菌大麗輪枝菌具有顯著地抑菌效果,其抑菌效果超過(guò)了9.5%的克黃枯,相對(duì)防效達(dá)到了85.4%。
對(duì)分離得到的脂肽類(lèi)物質(zhì)進(jìn)行制備型HPLC分離后得到了surfactin,與生
2、物表面活性素surfactin標(biāo)準(zhǔn)品出峰保留時(shí)間一致,且經(jīng)TLC茚三酮實(shí)驗(yàn)后發(fā)現(xiàn)為環(huán)肽,經(jīng)表面張力儀測(cè)定其水溶液的表面張力發(fā)現(xiàn)可有效降低溶液表面張力,其臨界膠束濃度CMC經(jīng)測(cè)定為30 mg/L因此初步判斷其為surfactin。對(duì)其進(jìn)行進(jìn)一步質(zhì)譜發(fā)現(xiàn),其電噴霧質(zhì)譜得到的[M+H]+值分別為m/z1007.0、1021.0、1035.0,與surfactin標(biāo)準(zhǔn)品的三種同系物結(jié)果一致,其相差值皆為14D,預(yù)測(cè)可能為亞甲基(-CH2)。
3、r> 在脂肪酶催化降解油脂的過(guò)程中添加surfactin,比較其對(duì)脂肪酶催化能力的影響,結(jié)果發(fā)現(xiàn)在催化豆油,Tris-HCl緩沖液pH7.5條件下,酶濃度1%,溫度35℃,脂肪酶達(dá)到最大活性所需的BP-1最小添加量為400μL(2 mg/mL)。催化效率提高了43.1%,酶活達(dá)到了98 U/g,相較于化學(xué)表面活性劑(SDS、季銨、吐溫-20),對(duì)反應(yīng)后的產(chǎn)物進(jìn)行甲酯化后進(jìn)氣相色譜檢測(cè),發(fā)現(xiàn)產(chǎn)物中的組分含量提高了123.8%。
4、 在對(duì)β-葡萄糖苷酶催化合成紅景天苷的研究顯示,在添加surfactin的情況下,紅景天苷的收率達(dá)到59.2%,相較于其他化學(xué)合成型表面活性劑,surfactin對(duì)β-葡萄糖苷酶的活性影響最大。證明surfactin可以有效地提高其酶活。
結(jié)果顯示從枯草芽孢桿菌發(fā)酵液中分離純化得到的脂肽類(lèi)化合物中包含surfactin,其對(duì)脂肪酶及β-葡萄糖苷酶的催化活性有著顯著地提高,對(duì)于擴(kuò)大脂肪酶的工業(yè)應(yīng)用與β-葡萄糖苷酶催化合成紅景天苷
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