1、目的:
　　 我們前期研究發(fā)現(xiàn),出生后間歇性低壓低氧暴露能夠增強小鼠空間記憶,但同時損害聯(lián)合記憶。已知低氧能夠誘導神經發(fā)生,而轉錄因子Pax6(pairedhomebox6)在胚胎神經系統(tǒng)發(fā)育過程中能夠調節(jié)神經細胞的增殖和分化。因此本研究觀察出間歇性低氧對新生小鼠腦神經發(fā)生和Pax6表達的影響,以期探明其對記憶影響的神經機制。
　　 材料和方法:
　　 新生小鼠出生后立即分別暴露于模擬高原海拔2千米(16.0％O

2、2;PaO2,60mmHg)和5千米(10.8％O2;PaO2,41mmHg)低壓低氧環(huán)境,每天低氧暴露4小時,連續(xù)低氧4周。低氧結束后小鼠常氧環(huán)境分組飼養(yǎng)1周和4周。對照組為不低氧暴露小鼠(設為海平面,21％O2)。為了觀察神經發(fā)生情況,低氧結束后連續(xù)3天注射5-溴脫氧尿嘧啶核苷(5-Bromo-2-deoxyUridine,BrdU),每天一次;為了觀察新生神經細胞是否能夠與原有神經細胞建立聯(lián)系,每組小鼠在處死前2小時給予足底電刺激

3、,免疫熒光方法用來觀察BrdU和c-fos在腦內的表達情況并進行定位分析;為了觀察低氧對Pax6表達的影響,分別用免疫熒光和western-blot技術對Pax6在腦內表達情況進行定位和定量分析。
　　 結果:
　　 1.低氧對神經發(fā)生的影響
　　 (1)與對照組相比,低氧暴露4周小鼠在腦內OV、LV、pir、Or、DG、門、丘腦和運動皮質等區(qū)域存在BrdU陽性細胞,而且2千米低氧處理組的BrdU陽性細胞明顯比5

4、千米低氧處理組的BrdU陽性細胞多。
　　 (2)進一步研究發(fā)現(xiàn),BrdU與NeuN和GFAP都共存。
　　 (3)BrdU陽性細胞可以持續(xù)存活到低氧結束后4周。
　　 (4)低氧結束后4周,發(fā)現(xiàn)c-fos表達于新生的NeuN陽性細胞。
　　 2.低氧對Pax6表達的影響
　　 (1)在正常對照30天齡小鼠中,Pax6在多個腦區(qū)表達,包括OV、VBD、VP、LV、pir、M、aca、Tu、LSI、

5、LSV、BSTLD、MPOM、LPO、3V、Pe、LH、VMH、BLA、BMA、Aco、BLV、st、LDVL、MGP、VMHDM、alv、Or、PLCo、PMCo、Mtu、BSTAI、MePD、MePV、PH、ns、ec、Astr、BMP、VPM、VM、VPL、DG、Lmol、FC、SubG、RPF、ZIV、ZID、MM。
　　 (2)低氧4周結束后(出生后30天),模擬高原2千米低壓低氧處理組表達Pax6的核團有OV、Pir

6、、LV、DG、Mtu、BMP和PLCo;模擬高原5千米低壓低氧處理的實驗動物中表達Pax6的區(qū)域有OV、pir、Or、Tu、M、VDB、LV、VP、LSI、LSV、MPOM、DM、MCPO、PLCo、MGP、Pe、LH、VMH、BMA、BLA、LDVL和MePD。
　　 (3)低氧暴露4周后,Pax6與NeuN和GFAP都共存表達,并且小鼠腦內可見Pax6與BrdU共染。
　　 (4)Western-blot定量結果顯示

7、:①橫向比較發(fā)現(xiàn),在低氧結束后和低氧結束后1周,與對照組比較,2千米和5千米低氧暴露小鼠(244,544和245,545表示)的Pax6表達量顯著減少;②縱向比較低氧結束后、低氧結束后1周和低氧結束后4周小鼠發(fā)現(xiàn),對照組、2千米低氧組和5千米低氧組腦內Pax6的表達量都逐漸增加。相對于對照組的增加,5千米低氧出生后8周處死實驗動物(548表示)Pax6表達量比對照組8周處死實驗動物(048表示)顯著增多。
　　 結論:
　

8、　 1.出生后間歇性低壓低氧暴露可以促進小鼠腦神經發(fā)生,這種新發(fā)生的細胞可以同時分化為神經細胞和星形膠質細胞。新發(fā)生的細胞可以長時間存活,并可與已有的成熟神經細胞建立神經環(huán)路連接。
　　 2.出生后腦內仍然有大量腦區(qū)的神經細胞和膠質細胞都表達Pax6。出生后低氧顯著減少Pax6在腦內多個區(qū)域的表達。
　　 3.在低氧暴露小鼠腦內,Pax6可見與BrdU共同表達于NeuN陽性細胞,提示Pax6可能參與了低氧誘導神經細胞的