1、暨南大學碩士學位論文題名（中英對照）：人臍帶間充質干細胞向角膜內皮樣細胞分化的初步實驗研究人臍帶間充質干細胞向角膜內皮樣細胞分化的初步實驗研究DifferentiationofHumanUmbilicalCdderivedMesenchymalStemCellsintoCnealEndotheliumlikeCellsinVitro作者姓名：祁冰祁冰指導教師姓名及學位、職稱：侯光輝侯光輝主任醫(yī)師主任醫(yī)師副教授副教授學科、專業(yè)名稱：眼科學

2、眼科學論文提交日期：2014年4月論文答辯日期：答辯委員會主席：論文評閱人：學位授予單位和日期：暨南大學碩士學位論文I人臍帶間充質干細胞向角膜內皮樣細胞分化的初步實驗研究人臍帶間充質干細胞向角膜內皮樣細胞分化的初步實驗研究中文摘要中文摘要組織工程角膜是近來興起的一項非常有前景的治療手段，其可克服供體角膜的缺乏和可能發(fā)生的免疫排斥反應等由傳統(tǒng)角膜移植術所帶來的局限。組織工程角膜構建最突出的問題是種子細胞的來源。由于目前大量體外培養(yǎng)獲取人的

3、角膜內皮細胞仍面臨著許多困難。因此，尚需進一步尋找其他種類的細胞作為內皮細胞的替代細胞。人臍帶間充質干細胞因獲取方便、無創(chuàng)及避免了胚胎干細胞倫理學爭議等優(yōu)點，近年來被廣泛的應用于臨床研究。臍帶間充質干細胞可分化為多種間葉組織細胞，其同時在組織和細胞替代治療及再生醫(yī)學方面具有極大的應用價值。眾所周知，人類和嚙齒類動物角膜內皮組織起源于神經(jīng)嵴的眼周間葉組織。臍帶間充質干細胞在體外可大量擴增并具有多向分化的潛能。因此，其是體外替代角膜內皮細胞

4、的理想種子細胞來源。本研究中，我們通過共培養(yǎng)體系成功將人臍帶間充質干細胞誘導分化成具有類似內皮細胞形態(tài)、標志物及功能特性的內皮樣細胞。第一部分：第一部分：人臍帶間充質干細胞的體外分離、培養(yǎng)和鑒定人臍帶間充質干細胞的體外分離、培養(yǎng)和鑒定目的：目的：建立人臍帶間充質干細胞分離、培養(yǎng)和鑒定的方法。方法：方法：用膠原酶消化法分離人臍帶間充質干細胞，并置于37℃，5%CO2孵育箱中培養(yǎng)，待其貼壁傳代后于倒置顯微鏡下行細胞形態(tài)學觀察；流式細胞儀檢測

5、其表面抗原表型；堿性磷酸酶及茜素紅染色鑒定其成骨誘導后的鈣質沉積，油紅O用于成脂誘導后脂滴染色觀察。結果：結果：我們利用膠原酶消化法成功分離培養(yǎng)出人臍帶間充質干細胞，細胞表達多種抗原表型，如CD29CD44CD90和CD105，但不表達造血細胞及與移植排斥相關的抗原表型，如CD14CD31CD34CD40CD45和HLADR。在條件培養(yǎng)中可誘導分化為骨和脂肪細胞。結論：結論：通過膠原酶消化法可成功分離培養(yǎng)出人臍帶間充質干細胞；分離培養(yǎng)的