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文檔簡介
1、目的: 測定不同濃度雌激素對體外培養(yǎng)人大網(wǎng)膜脂肪細胞瘦素、脂聯(lián)素mRNA表達的影響。 方法: 1.選擇擇期開腹手術(shù)病人,無菌條件下新鮮切取腹部大網(wǎng)膜脂肪組織,經(jīng)膠原酶消化分離人前脂肪細胞。用DMEM/F12(1:1)培養(yǎng)基在37℃、5%CO2條件下培養(yǎng),并誘導(dǎo)分化為成熟脂肪細胞。 2.對脂肪細胞進行干預(yù):用不同濃度的雌二醇(1nmol/L、10nmol/L、100nmol/L)干預(yù)24h;選取高濃度組,即
2、雌二醇100nmol/L干預(yù)12h、24h、48h。用細胞形態(tài)學(xué)和油紅O染色法鑒定細胞,用半定量反轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-PCR)法檢測脂肪細胞瘦素、脂聯(lián)素mRNA表達水平。 3.數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(-x±S)表示,采用完全隨機設(shè)計的單因素方差分析(One-way ANOVA)進行處理,P<0.05為有統(tǒng)計學(xué)意義。 結(jié)果: 1.成功地培養(yǎng)出人大網(wǎng)膜前脂肪細胞。 培養(yǎng)出的梭形細胞成分均一、增殖旺盛、分化
3、率高,經(jīng)細胞形態(tài)學(xué)的動態(tài)觀察及油紅O脂肪染色抽取法的鑒定,證明是功能活躍的前脂肪細胞。 2.半定量RT-PCR法擴增瘦素、脂聯(lián)素(348bp、124bp),結(jié)果表明: ①雌二醇在1nmol/L-100nmol/L范圍內(nèi)以劑量依賴性方式促進瘦素表達,最高達對照組的1.68倍。 ②雌二醇在1nmol/L-100nmol/L范圍內(nèi)以劑量依賴性方式抑制脂聯(lián)素表達,抑制率最高達對照組的51.8%。 ③雌二醇100n
4、mol/L在12h-48h范圍內(nèi)以時間依賴性方式促進瘦素表達。 ④雌二醇100nmol/L在12h-48h范圍內(nèi)以時間依賴性方式抑制脂聯(lián)素表達。 3.瘦素與脂聯(lián)素的表達呈負相關(guān)。 結(jié)論: 1.使用膠原酶消化的方法分離并原代培養(yǎng)了人大網(wǎng)膜前脂肪細胞,驗證了本實驗室建立的細胞培養(yǎng)模型的可行性及實用性,為研究各種激素對脂肪細胞因子的作用提供了基礎(chǔ)。 2.離體狀態(tài)下雌激素促進瘦素表達、抑制脂聯(lián)素表達,為更
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