1、鉤體病是致病性鉤體引起的嚴(yán)重人獸共患病，我國(guó)是主要流行區(qū)之一。人通過直接或間接接觸感染動(dòng)物尿液而感染。典型鉤體病感染者除發(fā)熱、黃疸外，可出現(xiàn)皮膚和臟器廣泛出血。急性患者常因彌漫性肺出血而死亡。故鉤體病的早期診斷，對(duì)有效治療和控制流行十分重要。 野生鼠由于帶菌率高，帶菌時(shí)間長(zhǎng)，是鉤體病的主要傳染源。在前期研究中，我們建立了小鼠持續(xù)性感染模型，該模型與常用的金黃地鼠及豚鼠急性致死性感染模型相互補(bǔ)。通過檢測(cè)小鼠血清中特異性免疫應(yīng)答水平

2、，并結(jié)合免疫病理學(xué)，初步探討了小鼠感染鉤體后免疫應(yīng)答的動(dòng)態(tài)變化，及其與病理學(xué)之間的相關(guān)聯(lián)系。 在建立的小鼠肺出血型鉤體病感染模型中我們發(fā)現(xiàn)，與豚鼠等敏感動(dòng)物感染鉤體后急性致死性感染不同，在感染第4天，第16天的小鼠病理解剖及組織病理學(xué)檢查可見明顯病變表現(xiàn)，但無一例小鼠死亡。自感染第28天的小鼠肝臟組織及感染第42天的小鼠腎臟組織中仍可培養(yǎng)出鉤體，證實(shí)其為慢性帶菌狀態(tài)。故小鼠應(yīng)可作為鉤體病慢性感染及帶菌者模型。此外，根據(jù)其感染后體

3、液免疫與細(xì)胞免疫水平變化規(guī)律，我們?cè)谠缙谝欢A段再次攻擊感染，期望建立急性鉤體病感染模型。結(jié)果顯示，與正常感染組相比，再感染組表現(xiàn)出較嚴(yán)重的腎臟病變。 鉤體外膜蛋白(outer membrane protein,OMP)作為主要的外膜抗原，可以刺激機(jī)體產(chǎn)生抗體。我們已從致病性問號(hào)鉤體賴株的全基因組數(shù)據(jù)庫中數(shù)百種預(yù)測(cè)的外膜蛋白基因中挑選了一部分進(jìn)行克隆表達(dá)。研究證實(shí)其核苷酸及蛋白質(zhì)序列在15株致病性鉤體中高度保守。通過免疫印跡技術(shù)

4、我們初步驗(yàn)證了重組外膜蛋白如LipL21、LipL32、OmpL1、LipL41、Qlp42等的抗原性。通過免疫新西蘭兔制備了多克隆血清，初步驗(yàn)證了其免疫反應(yīng)性。前期試驗(yàn)結(jié)果顯示，重組LipL32和OmpL1作為包被抗原與已知鉤體病患者血清反應(yīng)，具有較強(qiáng)的特異性和敏感性。 臨床上急慢性期鉤體病患者血清不易取得且樣本標(biāo)準(zhǔn)化難度高。我們的前期研究通過小鼠血清中特異性免疫應(yīng)答水平結(jié)合病理學(xué)表現(xiàn)，制備出不同感染階段的標(biāo)準(zhǔn)鼠血清，已用于上