1、背景：早產(chǎn)是嚴重影響圍生兒發(fā)病率和死亡率的重要原因，對于早產(chǎn)及時有效的治療可以改善圍生兒結局，提高出生人口素質。早產(chǎn)治療中積極促胎肺成熟是基本原則，因此臨床上常采用產(chǎn)前糖皮質激素治療。其中單療程糖皮質激素治療效果肯定，副作用小，已被臨床接受。但對于治療1周后未分娩的早產(chǎn)孕婦，是否給予重復療程糖皮質激素治療，目前尚未達成共識。動物試驗結果發(fā)現(xiàn)重復給予糖皮質激素能引起胎仔生長受限、神經(jīng)發(fā)育遲緩等副作用，而對人的臨床觀察并不支持此觀點。因此，

2、對于產(chǎn)前重復糖皮質激素治療的正確評價有著重要的臨床意義。近年來，通過對胎兒印跡效應的研究發(fā)現(xiàn)，胎盤中存在糖皮質激素代謝的重要調節(jié)酶：11β-羥基類固醇脫氫酶(11β-hydroxysteroiddehydrogenase，11β-HSD)，其中11β-HSD2可以滅活有活性的糖皮質激素，從而起到保護胎兒的屏障作用。但是，臨床重復糖皮質激素治療后對于胎盤部位11β-HSD2表達有無影響，11β-HSD2是否起到積極的保護作用，尚未見報道。

3、 目的： 1、評價臨床產(chǎn)前不同療程糖皮質激素治療早產(chǎn)后對母兒結局的近、遠期影響； 2、觀察臨床產(chǎn)前不同療程糖皮質激素治療后早產(chǎn)胎盤絨毛11β-HSD2和糖皮質激素受體(GR)的表達； 3、探討地塞米松對離體早產(chǎn)胎盤絨毛滋養(yǎng)細胞11β-HSD2和GR表達的影響。 方法： 1、分析近六年在四川大學華西第二醫(yī)院分娩的早產(chǎn)病例，根據(jù)產(chǎn)前是否接受糖皮質激素(GC)治療及療程，分為：未用組、不足1療程

4、組、1療程組、2 療程組和3療程及以上組；記錄早產(chǎn)兒出生體重、身長、Apgar評分及近期并發(fā)癥，并隨訪1～7年體格發(fā)育、神經(jīng)和智力發(fā)育及運動功能等，通過多因素Logistic回歸分析評價重復療程糖皮質激素治療對早產(chǎn)兒結局的影響。 2、收集臨床分娩的早產(chǎn)胎盤，根據(jù)產(chǎn)前接受糖皮質激素治療與否及療程同前分組。通過SYBR Green I熒光染料定量PCR方法檢測各組胎盤絨毛11β-HSD2和GRmRNA表達，并用免疫組化方法檢測胎盤絨

5、毛11β-HSD2和GR蛋白。 3、收集早產(chǎn)分娩胎盤，通過酶消化法和組織塊培養(yǎng)法進行原代絨毛滋養(yǎng)細胞培養(yǎng)，對于獲得的滋養(yǎng)細胞進行純化、鑒定；用地塞米松(100nM)體外模擬兩療程GC給藥干預原代培養(yǎng)的絨毛滋養(yǎng)細胞，通過SYBR Green I熒光染料定量PCR方法檢測用藥后1～7d每天滋養(yǎng)細胞11B-HSD2和GR mRNA表達情況，并用Western blot免疫印跡法檢測胎盤絨毛11β-HSD2和GR蛋白表達；此外在地塞米松

6、干預的同時加入RU486(1μM)共同作用檢測每天滋養(yǎng)細胞11β-HSD2和GR的蛋白和mRNA表達情況。 結果： 1、四川大學華西第二醫(yī)院近6年間住院病人早產(chǎn)發(fā)生率4.6％；胎膜早破是導致早產(chǎn)的最主要原因，占36.0％；新生兒出生體重和身長Z積分，GC治療組與對照組間無顯著性差異(P>0.05)，不同療程GC治療組間比較無顯著性差異(P>0.05)；產(chǎn)前2療程GC治療后早產(chǎn)兒1minApgar≤7分發(fā)生風險降低(OR,

7、0.57；95％CI,0.35～0.92)，3療程治療后亦降低(OR,0.10；95％CI,0.01-0.74)；產(chǎn)前2療程GC治療后早產(chǎn)兒5minApgar≤7分發(fā)生風險降低(OR,0.13；95％CI,0.03-0.43)；2療程GC治療后嬰幼兒死亡風險下降(OR,0.18；95％cLo.04-0.87)；GC治療組母兒感染發(fā)病率與對照組無明顯差異。 2、免疫組織化學染色法可見胎盤絨毛部位有11β-HSD2和GR蛋白表達；S

8、YBRGreen I熒光染料定量PCR法檢測未使用糖皮質激素組(對照組)胎盤11β-HSD2mRNA表達低于使用糖皮質激素組(P<0.05)，各療程激素治療組表達均高于對照組(P<0.05)，各療程激素治療組間比較無差異(P>0.05)；胎盤GR mRNA表達在各療程激素治療組與對照組及各激素治療組間表達比較無差異(P>0.05)；免疫組化檢測結果與熒光定量PCR法結果一致。 3、通過酶消化法結合組織塊培養(yǎng)法，可以獲取高純度的早

9、產(chǎn)階段晚孕胎盤滋養(yǎng)細胞；SYBR Green I熒光染色定量PCR法可在體外培養(yǎng)滋養(yǎng)細胞檢測到11β-HSD2和GR mRNA表達；Western blot可在體外培養(yǎng)滋養(yǎng)細胞檢測到11β-HSD2和GR蛋白表達；DEX干預原代培養(yǎng)滋養(yǎng)細胞，培養(yǎng)1d后11β-HSD2 mRNA表達開始上升，第2d和第3d繼續(xù)升高(P<0.05)，第4d改為無藥物培養(yǎng)液后表達明顯下降，第5d～7d重復給藥后再次升高(P<0．05)；在地塞米松干預的同時加

10、入RU486(1μM)共同作用，可見每天滋養(yǎng)細胞11β-HSD2和GR的蛋白和mRNA表達有所下降(P>0．05)；Western blot檢測結果與熒光定量PCR法一致。 結論： 1、臨床資料顯示重復療程GC治療可以降低早產(chǎn)兒低Apgar評分發(fā)生，具有促胎肺成熟作用；同時并未降低出生胎兒體重和身長，未影響嬰幼兒生長發(fā)育和增加母兒感染發(fā)生。因此重復產(chǎn)前糖皮質激素治療利大于弊，可在臨床中繼續(xù)使用； 2、產(chǎn)前給予早產(chǎn)

11、孕婦糖皮質激素治療可以刺激胎盤11 β-HSD2表達，但對GR表達無明顯改變，此效應不隨療程增加而變化，表明胎盤滋養(yǎng)細胞在DEX刺激下具有調節(jié)11 β-HSD2能力，并且此能力不因臨床GC療程增加而減弱，因此參與對胎兒的屏障保護作用； 3、酶消化法結合組織塊培養(yǎng)法，可以從輕度早產(chǎn)胎盤上獲取高純度的胎盤滋養(yǎng)細胞；重復給予DEX具有刺激原代培養(yǎng)的胎盤絨毛滋養(yǎng)細胞增加11 β-HSD2蛋白和mRNA表達的作用；聯(lián)合RU486用藥后可以