1、目的：探討半枝蓮提取物對(duì)白血病K562細(xì)胞增殖及凋亡的作用,以及對(duì)K562細(xì)胞血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)及其受體-1(VEGFR-1)表達(dá)的影響。
　　方法：實(shí)驗(yàn)組(半枝蓮提取物0.1mg/ml,0.2mg/ml,0.5mg/ml,1.0mg/ml)及空白對(duì)照組(半枝蓮提取物0mg/ml),作用于K562細(xì)胞24、48、72小時(shí)后:在倒置顯微鏡下觀(guān)察K562細(xì)胞形態(tài);MTT法檢測(cè)各組對(duì)K562細(xì)胞增殖情況的影響;流式細(xì)胞儀技術(shù)檢

2、測(cè)K562細(xì)胞凋亡及細(xì)胞周期分布情況。各實(shí)驗(yàn)組及空白對(duì)照組作用于 K562細(xì)胞48小時(shí)后:RT-PCR法檢測(cè) K562細(xì)胞中 VEGF、VEGFR-1mRNA的表達(dá);酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測(cè) K562細(xì)胞上清液中VEGF的濃度。
　　結(jié)果：1、倒置顯微鏡顯示隨實(shí)驗(yàn)組藥物濃度增加及作用時(shí)間的延長(zhǎng),K562細(xì)胞數(shù)目減少。細(xì)胞碎片增多,K562細(xì)胞出現(xiàn)核碎裂等凋亡形態(tài)學(xué)改變。2、MTT法檢測(cè)結(jié)果表明,半枝蓮提取物在較低濃度(0.

3、1mg/ml,0.2mg/ml)作用較短時(shí)間(24h)時(shí),對(duì)K562細(xì)胞的增殖抑制不明顯,與空白對(duì)照組相比無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p>0.05)。在半枝蓮提取物0.5mg/ml作用24h開(kāi)始,對(duì)K562細(xì)胞有明顯的抑制作用,與空白對(duì)照組相比(p<0.05),有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。且隨著藥物濃度的升高,及作用時(shí)間的延長(zhǎng),抑制率呈上升趨勢(shì),各組間比較(p<0.05),有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。3、流式細(xì)胞儀結(jié)果顯示,半枝蓮提取物可以使K562細(xì)胞周期分布發(fā)生改變,表現(xiàn)為

4、G0/G1期細(xì)胞比例上升,S期及G2/M期細(xì)胞比例下降。且隨實(shí)驗(yàn)組藥物濃度增加,K562細(xì)胞G0/G1期細(xì)胞比例呈逐漸上升趨勢(shì),而S期及G2/M期細(xì)胞比例為逐漸下降趨勢(shì);并且流式細(xì)胞儀顯示,隨實(shí)驗(yàn)組藥物濃度升高及作用于K562細(xì)胞的時(shí)間延長(zhǎng),細(xì)胞凋亡率逐漸升高,且均高于空白對(duì)照組,各組間比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05)。4、RT-PCR顯示不同濃度半枝蓮提取物作用于K562細(xì)胞48h后均可降低VEGFmRNA及VEGFR-1mRNA的表

5、達(dá),目的基因與β-actin灰度比值逐漸下降,并有一定的濃度依賴(lài)趨勢(shì),各組間比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05)。在0.2mg/ml組時(shí)電泳條帶較空白對(duì)照組明顯變淺,1.0mg/ml組較其余各組比較條帶最淺。5、ELISA法結(jié)果顯示空白組K562細(xì)胞上清液中VEGF的濃度為996.78±14.76pg/ml,各組半枝蓮提取物(0.1mg/ml,0.2mg/ml,0.5mg/ml,1.0mg/ml)作用K562細(xì)胞48h后,VEGF濃度分別下

6、降為760.30±9.47 pg/ml,709.69±11.23 pg/ml,549.46±8.63 pg/ml,452.78±13.59 pg/ml,各組間比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05)。
　　結(jié)論：(0.1 mg/ml-1.0mg/ml)的半枝蓮提取物在(24h-72h)之間能抑制K562細(xì)胞的增殖,改變細(xì)胞周期分布,使細(xì)胞由G0/G1期向S期轉(zhuǎn)變的過(guò)程受阻,誘導(dǎo)K562細(xì)胞凋亡,并呈一定的濃度及時(shí)間依賴(lài)趨勢(shì)。其作用機(jī)制可能