1、YS0‘788湖北中醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文，補(bǔ)腎活血湯對(duì)多裳卵巢大鼠的影響研究生姓名：指導(dǎo)教師姓名、職稱：學(xué)科、專業(yè)名稱：研究方向：江勝芳張昌軍教授主任醫(yī)師中西醫(yī)結(jié)合臨床生殖醫(yī)學(xué)二OO六年四月二十八日湖北中醫(yī)學(xué)院2003級(jí)碩上研究生畢業(yè)論文摘要目的：本實(shí)驗(yàn)成功地建立了多囊卵巢大鼠病理模型，并以此為研究對(duì)象，運(yùn)用光鏡、放射免疫、免疫組化及末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)的duTP缺口末端標(biāo)記(TuNEL)技術(shù)，觀察中藥補(bǔ)腎活血湯對(duì)多囊卵巢大鼠內(nèi)分泌、

2、卵巢形態(tài)學(xué)的影響，重點(diǎn)研究卵巢卵泡閉鎖，顙粒細(xì)胞凋亡及Bcl一2，Bax的表達(dá)情況，以期從細(xì)胞及分子水平揭示補(bǔ)腎活血湯的作用機(jī)制，為新藥的研制和開發(fā)提供理論依據(jù)。材料及方法：選用24日齡末成年雌性sD大鼠60只，隨機(jī)分為病理模型組50只和正常對(duì)照組lo只。應(yīng)用皮下埋植左炔諾孕酮硅膠棒聯(lián)合皮下注射HcG法建立多囊卵巢動(dòng)物模型。造模成功后給予補(bǔ)腎活血湯高、中、低劑量灌胃30天，對(duì)照組給予同容積蒸餾水灌胃。于24日齡、36日齡、67日齡測體重

3、，比較造模前后、用藥前后大鼠體重。大鼠斷頭處死，取血，收集血清樣品，放免法測定血清中孕酮(P)、雌二醇(E2)、睪酮(T)的含量。大鼠處死后立即取出雙側(cè)卵巢稱重，分別測量卵巢長徑(L)、短徑(s)，計(jì)算平均卵巢面積MOP=Lxs卵巢體積v=419((Ls比戶。卵巢切片常規(guī)HE染色，計(jì)算每張切片黃體數(shù)、囊狀卵泡數(shù)、囊狀擴(kuò)張卵泡比例，進(jìn)行卵泡膜細(xì)胞層最大厚度及顆粒細(xì)胞層最大厚度的顯微測量。TuNEL法檢測顆粒細(xì)胞凋亡，以細(xì)胞核出現(xiàn)褐色顆粒為

4、陽性結(jié)果，計(jì)算每張切片凋亡顆粒細(xì)胞數(shù)、闖鎖卵泡效，測量最大閉鎖卵泡直徑。采用免疫組織化學(xué)sABc法測定卵巢Bc卜2，Bax的表達(dá)以細(xì)胞漿內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性結(jié)果每張切片在400倍高倍視野下隨機(jī)取5個(gè)視野，根據(jù)陽性細(xì)胞所占比例和染色強(qiáng)度進(jìn)行半定量判定。染色強(qiáng)度按下列標(biāo)準(zhǔn)評(píng)定：陰性為。分；染色雖弱但明顯強(qiáng)于陰性對(duì)照者為1分；染色強(qiáng)度中等者為2分；染色強(qiáng)者為3分染色的陽性細(xì)胞所占比側(cè)評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)為：陽性細(xì)胞數(shù)75％者為非常強(qiáng)陽性(4分)兩種評(píng)分

5、相加，即為其陽性積分?jǐn)?shù)據(jù)處理：計(jì)量資科以均值士標(biāo)準(zhǔn)差表示，組問差異的比較采用雙側(cè)t檢驗(yàn)率的比較采用兩樣本率等價(jià)比較的u檢驗(yàn)。PO05為差別顯著，PO01為差別非常顯著結(jié)果：大鼠體重：補(bǔ)腎活血湯高、中、低劑量組大鼠用藥前體重與模型組比較無顯著性差異，用藥后均明顯低于模型組。卵巢犬體解剖觀察結(jié)果：遣模后模型組大鼠卵巢重量、體積、平均卵巢面積均大于對(duì)照組(P均O01)，卵巢表面較蒼白，見較多囊狀擴(kuò)張的卵泡補(bǔ)腎活血湯治療后卵巢色澤紅潤，高劑量組