1、目的：通過建立大鼠組織中血管內(nèi)皮生長因子實時熒光定量PCR檢測方法以及Ⅱ型膠原誘導(dǎo)型關(guān)節(jié)炎大鼠模型，評價雷公藤多苷對VEGF mRNA在不同組織中表達水平的影響，探討其治療類風濕關(guān)節(jié)炎的可能作用機理。 方法：1.跨內(nèi)含子設(shè)計引物和TaqMan探針，驗證種屬特異性，在ABI7500實時熒光循環(huán)儀上建立檢測方法，擴增片段TA克隆，測序并制作標準品，分析其特異性、靈敏性和重復(fù)性。2.建立大鼠Ⅱ型膠原性關(guān)節(jié)炎（CIA）模型，將造模成功大

2、鼠45只隨機分為三組：模型對照組、雷公藤多苷片組、沙利度胺片組，選10只健康大鼠為正常組，共四組。均灌胃給藥。自造模起隔天檢測關(guān)節(jié)炎指數(shù)積分和關(guān)節(jié)腫脹度；給藥4周后檢測大鼠肺臟、心臟、肝臟、腎臟和關(guān)節(jié)滑膜組織中VEGFmRNA表達。 結(jié)果：1.測序及電泳條帶證實PCR反應(yīng)的特異性，批內(nèi)CV（變異系數(shù)）為2.0-6.7％，批間CV值為3.5-10.6％，標準品線形范圍為6.6×107-6.6×100 copies/ul，r>0.9

3、9。2.實驗表明：用藥4周后，雷公藤多苷片組、沙利度胺片組動物關(guān)節(jié)炎評分和關(guān)節(jié)腫脹度均低于模型組（P<0.01）。雷公藤多苷片組對大鼠不同部位組織中VEGF mRNA表達水平降低與模型組比較有顯著差異（P<0.05），與沙利度胺片組無差異（P>0.05）。 結(jié)論：本研究成功建立了檢測VEGF的實時熒光定量PCR方法，具有高靈敏、高特異、高重復(fù)性的特點。雷公藤多苷可以通過降低VEGF表達水平抑制血管過度生成從而發(fā)揮抗類風濕關(guān)節(jié)炎作