1、結(jié)腸癌是一種較為常見(jiàn)的消化道腫瘤，其傳統(tǒng)的治療原則以手術(shù)為主的綜合治療，同時(shí)聯(lián)合化療、放療等降低手術(shù)后的復(fù)發(fā)率，提高患者的生存率。對(duì)于復(fù)發(fā)性或轉(zhuǎn)移性結(jié)腸癌，其中綜合治療在化療中占主要地位。近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)環(huán)氧化酶-2(COX-2)可以通過(guò)其多種途徑參與腫瘤的發(fā)生及發(fā)展，可以抑制腫瘤細(xì)胞的凋亡，促進(jìn)新生血管的生成。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)奧沙利鉑(L-OHP)，COX-2抑制劑NS-398及奧沙利鉑聯(lián)合NS-398對(duì)結(jié)腸癌HCT-8細(xì)胞體外培養(yǎng)，研究其以

2、上物質(zhì)對(duì)細(xì)胞增殖和凋亡的影響。
　　為初步觀察與奧沙利鉑聯(lián)合作用的NS-398對(duì)HCT-8細(xì)胞在倒置顯微鏡下觀察到奧沙利鉑和奧沙利鉑聯(lián)合NS-398對(duì)結(jié)腸癌HCT-8細(xì)胞的生長(zhǎng)影響。結(jié)果出現(xiàn)奧沙利鉑和NS-398濃度的添加使其增高的細(xì)胞逐漸減少，變圓，貼壁細(xì)胞出現(xiàn)漂浮，折光性差。
　　接著運(yùn)用CCK-8實(shí)驗(yàn)檢測(cè)不同濃度奧沙利鉑單用(1.25、2.50、5.00、10.00、20.00 mg·L-1)，奧沙利鉑聯(lián)合NS-398

3、（20.00、80.00μmol·L-1）對(duì)HCT-8細(xì)胞作用24h的細(xì)胞抑制率;其運(yùn)用Annexin V-FITC和PI雙染流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)奧沙利鉑(10.00 mg·L-1)、 NS-398(50.00 mg·L-1)單用及奧沙利鉑聯(lián)合NS-398對(duì)HCT-8細(xì)胞作用24h的早期凋亡情況;并用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)奧沙利鉑，NS-398單用及奧沙利鉑聯(lián)合NS-398對(duì)HCT-8細(xì)胞48h的細(xì)胞周期變化。為進(jìn)一步研究觀察奧沙利鉑和NS-398對(duì)

4、細(xì)胞有無(wú)協(xié)同效應(yīng)，運(yùn)用瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)奧沙利鉑單用(2.50、5.00、10.00、20.00mg·L-1)及聯(lián)合NS-398（10.00、100.00μmol·L-1）對(duì)HCT-8細(xì)胞作用48h的DNA Ladder情況;利用熒光顯微鏡觀察細(xì)胞凋亡作用48h時(shí)凋亡情況。Caspase-3活性檢測(cè)奧沙利鉑和NS-398單用及聯(lián)合作用48h時(shí)結(jié)腸癌HCT-8細(xì)胞中Caspase-3活性增高的變化。
　　實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn):奧沙利鉑，NS-3

5、98對(duì)HCT-8細(xì)胞呈劑量性的依賴(lài)抑制作用(P＜0.05)。奧沙利鉑聯(lián)合NS-398作用組的HCT-8細(xì)胞增殖抑制率明顯高于同一濃度的奧沙利鉑單用組，并且隨著NS-398添加劑量而增加。Annexin V-FITC檢測(cè)細(xì)胞早期凋亡顯示奧沙利鉑呈劑量依賴(lài)性的誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡和細(xì)胞死亡，聯(lián)合作用組對(duì)HCT-8細(xì)胞明顯強(qiáng)于單用奧沙利鉑對(duì)HCT-8細(xì)胞的作用，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05）;細(xì)胞周期顯示，奧沙利鉑，NS-398及聯(lián)合作用組HCT

6、-8細(xì)胞48h后對(duì)照組相比，細(xì)胞周期能被阻滯，奧沙利鉑將HCT-8細(xì)胞的S期阻滯，NS-398將HCT-8細(xì)胞的G0/G1期阻滯，奧沙利鉑和NS-398可誘導(dǎo)結(jié)腸癌HCT-8細(xì)胞凋亡，對(duì)NS-398添加的奧沙利鉑細(xì)胞凋亡明顯增加。瓊脂糖凝膠電泳顯示奧沙利鉑，NS-398聯(lián)合作用結(jié)腸癌HCT-8細(xì)胞48h能檢測(cè)到DNA Ladder，NS-398不同劑量添加奧沙利鉑，DNA梯狀條帶亮于奧沙利鉑組。Hoechst33258熒光顯微鏡觀察細(xì)胞

7、凋亡作用48h時(shí)，正常細(xì)胞核呈彌散均勻的藍(lán)色，而凋亡細(xì)胞的細(xì)胞核呈致密濃染，或呈碎塊狀，顏色有些發(fā)白，聯(lián)合用藥后可見(jiàn)凋亡細(xì)胞明顯。Caspase-3活性檢測(cè)奧沙利鉑和NS-398單獨(dú)作用對(duì)結(jié)腸癌HCT-8細(xì)胞中Caspase-3活性增高。兩藥聯(lián)合作用時(shí)對(duì)結(jié)腸癌HCT-8細(xì)胞中Caspase-3活性起加強(qiáng)作用，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01），二者具有協(xié)同作用。
　　COX-2選擇性抑制劑NS-398，奧沙利鉑對(duì)結(jié)腸癌HCT-8細(xì)