1、人工誘導(dǎo)雌核發(fā)育(Artificiallyinducedgynogenesis)作為現(xiàn)代遺傳工程育種的新技術(shù)，是指用遺傳物質(zhì)失活但仍保持受精能力的同源或異源精子激活正常卵子發(fā)育，然后通過阻止第一、第二極體排出或第一次卵裂使染色體加倍，結(jié)果精核不形成功能性雄原核，卵細胞僅在雌核控制下發(fā)育成具有存活能力的二倍體個體。由于雌核發(fā)育后代純屬母系遺傳，各基因位點容易純合，便于快速建立純系，因而人工誘導(dǎo)雌核發(fā)育技術(shù)在水產(chǎn)動物的遺傳改良和新品種培育方

2、面具有巨大的潛在價值。另外，作為遺傳學(xué)上的稀有材料，雌核發(fā)育對性別控制、基因定位、基因-著絲粒重組、克隆等遺傳學(xué)問題的研究具有重要意義。本研究以我國北方沿海的主要養(yǎng)殖種類櫛孔扇貝為研究對象，進行了雌核發(fā)育二倍體誘導(dǎo)參數(shù)的優(yōu)化，并用熒光顯微鏡觀察法和組織切片法對其受精和早期卵裂的細胞學(xué)過程進行了觀察和描述。獲得的主要結(jié)果如下： 1.用紫外線照射法滅活精子的遺傳物質(zhì)，結(jié)合6-二甲基氨基嘌呤(6-DMAP)處理抑制受精卵第二極體釋放，

3、誘導(dǎo)櫛孔扇貝雌核發(fā)育二倍體。采用中心波長254nm、光照強度800μw/cm2·s的紫外線照射櫛孔扇貝精子50s，然后立即與正常卵子授精，在20℃水溫下，授精后35～40min光鏡下觀察到20～30％卵子排出第一極體時，分別以40～80mg/L的6-DMAP持續(xù)處理受精卵10、15、20min，染色體計數(shù)和流式細胞儀分析檢測各處理組二倍體率，篩選誘導(dǎo)櫛孔扇貝雌核發(fā)育二倍體兩因素的最佳組合。結(jié)果表明，60mg/L6-DMAP處理20min

4、組合得到了最佳效果，二倍體率為57.6％、D形幼蟲率22.25％。隨后對最佳條件組擔(dān)輪幼蟲進行了大量染色體統(tǒng)計和流式細胞儀分析，結(jié)果基本一致，二倍體率分別為54％、57.3％。 2.采用二氨基苯基吲哚(DAPI)染色和熒光顯微鏡觀察，對誘導(dǎo)出的櫛孔扇貝雌核發(fā)育二倍體卵在受精和第一、第二次卵裂過程中的核相變化進行了研究。結(jié)果顯示，紫外線處理過的精子入卵后發(fā)生不同程度的膨脹，有些能形成雄原核，逐漸與雌原核靠近，但二者不相融合；在第一

5、次卵裂中期，精核形成一致密的染色質(zhì)小體(DCB)，不參與核分裂，位于兩組分開的母本染色體之間，到第一次卵裂結(jié)束時DCB滯留于兩卵裂球的分裂溝上或進入其一的細胞質(zhì)中；第二次卵裂中，DCB的去向與第一次卵裂基本相同。6-DMAP處理有效抑制了受精卵第二次減數(shù)分裂，阻止了第二極體的形成和排出，從而使雌核二倍化。實驗中還出現(xiàn)了大量的非雌核發(fā)育二倍體，對其形成過程和原因進行了描述和分析。 3.用Bouin氏液固定、石蠟切片和蘇木精-伊紅染

6、色方法，在光鏡下對櫛孔扇貝正常發(fā)育和6-DMAP第二極體抑制型雌核發(fā)育二倍體卵在受精和第一、二次卵裂過程中的核相變化進行了詳細觀察和對比。結(jié)果表明，正常發(fā)育卵內(nèi)的雌、雄原核能融合為合子核，而雌核發(fā)育卵內(nèi)的精核、雌核變化相當(dāng)復(fù)雜。精核至少存在兩種狀態(tài)：(1)精核只在剛?cè)肼褧r發(fā)生輕微膨脹，以后保持固縮狀態(tài)，不膨大形成雄原核；(2)在第二次成熟分裂之后，精核再次去濃縮膨脹，但其體積并未達到正常雄原核的大小。在第一、第二次卵裂過程中，此精核不參