1、目的：
　　利用家蠅幼蟲抗菌肽針對急性淋巴細胞瘤sup-b15進行干預(yù)實驗，并通過實驗證明家蠅幼蟲抗菌肽對腫瘤細胞sup-b15有抑制作用。研究內(nèi)容由三部分組成：1.對比研究家蠅幼蟲抗菌肽的分離純化物與粗提物對sup-b15的抑制效能；2.驗證家蠅幼蟲抗菌肽聯(lián)合伊馬替尼對腫瘤細胞sup-b15是否具有增強抑制的作用；3.建立急淋白血病C57BL/6小鼠模型并探究家蠅幼蟲抗菌肽對其是否具有延長生存期的作用。
　　方法：

2、　　通過針刺誘導(dǎo)、研磨、離心、C18柱固相萃取等方法制備家蠅三齡幼蟲抗菌肽粗提物，利用反相高效液相色譜儀（RP-HPLC）進行分離純化，應(yīng)用CCK-8試劑盒檢測細胞抑制率，采用流式細胞儀檢測其誘導(dǎo)凋亡的效果。
　　采用臺盼蘭拒染法，血球計數(shù)板計數(shù)并計算細胞存活率，利用倒置光學顯微鏡觀察細胞并拍照。
　　選取健康的C57BL/6小鼠，經(jīng)環(huán)磷酰胺免疫抑制后，通過尾靜脈接種腫瘤細胞sup-b15，以此建立急淋白血病小鼠模型。對其實

3、施家蠅幼蟲抗菌肽干預(yù)后，觀察小鼠生存時間并繪制生長曲線，計算生命延長率。利用全自動血液檢測儀對小鼠外周血細胞記數(shù)，并對結(jié)果進行統(tǒng)計學分析，然后進行骨髓推片檢測并計算造模成功率。
　　結(jié)果：
　　實驗一：利用反相高效液相色譜儀（RP-HPLC）分離純化得到8種純化物，按照蛋白含量增加（Increased）和新生成（Generate）分別標記為I1、I2、I3、I4組和G1， G2、G3、G4組。家蠅幼蟲抗菌肽粗提物（Extra

4、cts）標記為E0組。通過CCK-8試劑盒檢測發(fā)現(xiàn)，8種純化物中有4種蛋白及粗提物（E0組）對sup-b15細胞有增殖抑制作用，細胞生存率均值分別為I1：71.4％、I2：78.5%、I4：64.1%、G2：68.6%、E0：56.1%。采用流式細胞儀檢測其誘導(dǎo)細胞凋亡的效果，其凋亡率均值分別為I1：16.73%、I2：9.79%、I4：18.60%、G2：11.85%、 E0：35.94%。
　　實驗二：光學顯微鏡下分別觀察實驗

5、組與對照組的細胞生長狀況，結(jié)果為：低倍鏡與高倍鏡下對照組的細胞增長旺盛，細胞密度大，細胞結(jié)構(gòu)完整；實驗組觀察到的結(jié)果相對于對照組而言細胞出現(xiàn)不同程度的增殖緩慢，密度減小，形態(tài)相對不完整。其中聯(lián)合用藥組抑制效果最為明顯，伊馬替尼組的抑制效果較抗菌肽組明顯。臺盼蘭染色后鏡下血球計數(shù)板計數(shù)，細胞存活率分別為：對照組：（91.37±1.68）%；單一抗菌肽用藥組：（54.71±2.76）%；單一伊馬替尼用藥組：（38.04±1.55）%；伊馬替

6、尼抗菌肽聯(lián)合用藥組：（21.19±1.27）%。
　　實驗三：實驗初期（前4天）各組C57BL/6小鼠未出現(xiàn)明顯異常反應(yīng)。接種第5天后實驗組小鼠生存質(zhì)量較對照組小鼠出現(xiàn)不同程度的下降，第8天開始實驗小鼠出現(xiàn)死亡。各實驗組中造模成功的C57BL/6小鼠生存時間分別為：實抗組12.52±1.39天；實對組10.9±1.59天；實P組10.8±1.97天。計算得知實抗組生命延長率為13.15%。各實驗組中造模成功的及對照組所有的C57B

7、L/6小鼠外周血進行細胞檢測，結(jié)果顯示各實驗組小鼠白細胞數(shù)量明顯增高，紅細胞及血小板數(shù)量明顯減少，對照組小鼠各血細胞數(shù)量正常。骨髓推片鏡下觀察到小鼠的有核細胞增生異常活躍，原始淋巴細胞及幼稚淋巴細胞明顯增多，占有核細胞的比例大幅度上升，成熟的淋巴細胞相對較少，其余各系統(tǒng)細胞較正常情況明顯減少。實驗組共有45只C57BL/6小鼠，其中造模成功的有13只，計算可得小鼠造模成功率為28.89%。
　　結(jié)論：
　　1.家蠅幼蟲抗菌肽